MAMP-ಎಲಿಸಿಟೆಡ್ ಡಿಫೆನ್ಸ್ ರೆಸ್ಪಾನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸೋರ್ಗಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಲೀಫ್ ಸ್ಪಾಟ್‌ಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಶಕ್ತಿಯ ಜೀನೋಮ್-ವೈಡ್ ಅಸೋಸಿಯೇಷನ್ ​​ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಸಸ್ಯ ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕ ವಸ್ತುಗಳು

ಇಲಿನಾಯ್ಸ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದಲ್ಲಿ (ಈಗ UC ಡೇವಿಸ್‌ನಲ್ಲಿದೆ) ಡಾ. ಪ್ಯಾಟ್ ಬ್ರೌನ್ ಅವರಿಂದ ಸೋರ್ಗಮ್ ಅಸೋಸಿಯೇಷನ್ ​​ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಸೋರ್ಗಮ್ ಕನ್ವರ್ಶನ್ ಪಾಪ್ಯುಲೇಶನ್ (SCP) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದನ್ನು ಹಿಂದೆಯೇ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು US ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಅನುಕೂಲವಾಗುವಂತೆ ಫೋಟೊಪೀರಿಯಡ್-ಅಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಚಿಕ್ಕದಾದ ಎತ್ತರಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾದ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ರೇಖೆಗಳ ಸಂಗ್ರಹವಾಗಿದೆ.ಈ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಿಂದ 510 ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಆದರೂ ಕೆಟ್ಟ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಂದಾಗಿ, ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿಲ್ಲ.ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಚಿಟಿನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ 345 ಸಾಲುಗಳಿಂದ ಡೇಟಾವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, flg22 ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ 472 ಸಾಲುಗಳು ಮತ್ತು TLS ಪ್ರತಿರೋಧಕ್ಕಾಗಿ 456.ಬಿ. ಕುಕೀಸ್ಟ್ರೈನ್ LSLP18 ಅನ್ನು ಅರ್ಕಾನ್ಸಾಸ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದಲ್ಲಿ ಡಾ. ಬರ್ಟ್ ಬ್ಲೂಮ್ ಅವರಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.

MAMP ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಾಪನ

ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ MAMP ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ flg22, (ಜೆನ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್# RP19986), ಮತ್ತು ಚಿಟಿನ್ .ಹಸಿರುಮನೆಯಲ್ಲಿ ಮಣ್ಣಿನಿಂದ (33% ಸನ್‌ಶೈನ್ ರೆಡಿ-ಅರ್ಥ್ ಪ್ರೊ ಗ್ರೋಯಿಂಗ್ ಮಿಕ್ಸ್) ತುಂಬಿದ ಫ್ಲಾಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಹಾಕಲಾದ ಒಳಸೇರಿಸುವಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಸೋರ್ಗಮ್ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಸಂಗ್ರಹದ ದಿನದಂದು ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಎಲೆಗಳ ತೇವಾಂಶವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ಹಿಂದಿನ ದಿನ ಸಸ್ಯಗಳಿಗೆ ನೀರುಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವ್ಯವಸ್ಥಾಪನಾ ಕಾರಣಗಳಿಗಾಗಿ, 60 ಸಾಲುಗಳ ಬ್ಯಾಚ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ನೆಡಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿ ಸಾಲಿಗೆ, ಮೂರು 'ಕುಂಡ'ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ ಸಾಲಿಗೆ ಎರಡು ಬೀಜಗಳನ್ನು ನೆಡಲಾಯಿತು.ಸಂಪೂರ್ಣ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವವರೆಗೆ ಹಿಂದಿನ ಬ್ಯಾಚ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೊಳಿಸಿದ ತಕ್ಷಣ ನಂತರದ ಬ್ಯಾಚ್‌ಗಳನ್ನು ನೆಡಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿ ಎರಡು ರನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನೋಟೈಪ್‌ಗಳನ್ನು ಮರು-ಯಾದೃಚ್ಛಿಕಗೊಳಿಸಿದ ಎರಡೂ MAMP ಗಳಿಗೆ ಎರಡು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ರನ್‌ಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.

ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ROS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಸಾಲಿಗೆ ಆರು ಬೀಜಗಳನ್ನು 3 ವಿವಿಧ ಕುಂಡಗಳಲ್ಲಿ ನೆಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಮೊಳಕೆಗಳಿಂದ, ಏಕರೂಪತೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಮೂರು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಅಸಾಧಾರಣವಾಗಿ ಕಾಣುವ ಅಥವಾ ಬಹುಪಾಲುಗಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಎತ್ತರದ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಇರುವ ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿಲ್ಲ.ಮೂರು ವಿಭಿನ್ನ 15-ದಿನದ ಮುಸುಕಿನ ಜೋಳದ ಗಿಡಗಳ 4ನೇ ಎಲೆಯ ವಿಶಾಲ ಭಾಗದಿಂದ 3 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದ ನಾಲ್ಕು ಎಲೆಗಳ ಡಿಸ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು ತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ.ಎರಡು ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿ ಎಲೆಗೆ ಒಂದು ಡಿಸ್ಕ್ ಮತ್ತು ಒಂದು ಸಸ್ಯದಿಂದ ಎರಡು ಡಿಸ್ಕ್ಗಳು, ಎರಡನೇ ಡಿಸ್ಕ್ ನೀರಿನ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಕೆಳಗೆ ನೋಡಿ).ಡಿಸ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ 50 µl H20 ನಲ್ಲಿ ಕಪ್ಪು 96-ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ತೇಲಲಾಯಿತು, ಬೆಳಕಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಸೀಲ್‌ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ರಾತ್ರಿಯ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮರುದಿನ ಬೆಳಿಗ್ಗೆ 2 mg/ml ಕೆಮಿಲುಮಿನಿಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಬ್ L-012 (Wako, ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ # 120-04891), 2 mg/ml ಹಾರ್ಸ್‌ರಾಡಿಶ್ ಪೆರಾಕ್ಸಿಡೇಸ್ (ಟೈಪ್ VI-A, ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ # P6782) ಬಳಸಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು. 100 mg/ml ಚಿಟಿನ್ ಅಥವಾ Flg22 ನ 2 μM.ಈ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ದ್ರಾವಣದ 50 μl ಅನ್ನು ಮೂರು ನಾಲ್ಕು ಬಾವಿಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ನಾಲ್ಕನೇ ಬಾವಿಯು ಅಣಕು ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿತ್ತು, ಇದಕ್ಕೆ MAMP ಅನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ನೀರನ್ನು ಮಾತ್ರ ಹೊಂದಿರುವ ನಾಲ್ಕು ಖಾಲಿ ಬಾವಿಗಳನ್ನು ಸಹ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ, ಸಿನರ್ಜಿ TM 2 ಮಲ್ಟಿ-ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಬಯೋಟೆಕ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರತಿ 2 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 1 ಗಂಟೆಗೆ ಪ್ರಕಾಶಮಾನತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ ಈ 1 ಗಂಟೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಪ್ರಕಾಶಮಾನ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನೀಡಲು ಎಲ್ಲಾ 31 ರೀಡಿಂಗ್ಗಳ ಮೊತ್ತವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಜೀನೋಟೈಪ್‌ಗೆ MAMP ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಅಂದಾಜು ಮೌಲ್ಯವನ್ನು (ಮೂರು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಬಾವಿಗಳ ಸರಾಸರಿ ಪ್ರಕಾಶಮಾನ ಮೌಲ್ಯ-ಅಣಕು ಬಾವಿ ಮೌಲ್ಯ) -ಮೈನಸ್ ಸರಾಸರಿ ಖಾಲಿ ಬಾವಿ ಮೌಲ್ಯ ಎಂದು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.ಖಾಲಿ ಬಾವಿ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸತತವಾಗಿ ಶೂನ್ಯಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರದಲ್ಲಿವೆ.

ಲೀಫ್ ಡಿಸ್ಕ್ಗಳುನಿಕೋಟಿಯಾನಾ ಬೆಂಥಾಮಿಯಾನಾ, ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಪ್ರತಿ 96-ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಪಂದಿಸುವ ಸೋರ್ಗಮ್ ಲೈನ್ (SC0003), ಮತ್ತು ಒಂದು ಕಡಿಮೆ ಸ್ಪಂದಿಸುವ ಸೋರ್ಗಮ್ ಲೈನ್ (PI 6069) ಅನ್ನು ಸಹ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಬಿ. ಕುಕೀಇನಾಕ್ಯುಲಮ್ ತಯಾರಿಕೆ ಮತ್ತು ಇನಾಕ್ಯುಲೇಷನ್

ಬಿ. ಕುಕೀಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಇನಾಕ್ಯುಲಮ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಮುಸುಕಿನ ಜೋಳದ ಧಾನ್ಯಗಳನ್ನು ಮೂರು ದಿನಗಳ ಕಾಲ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಿ, ತೊಳೆದು, 1L ಶಂಕುವಿನಾಕಾರದ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗಳಾಗಿ ಸ್ಕೂಪ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 15psi ಮತ್ತು 121 °C ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಗಂಟೆಯವರೆಗೆ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಧಾನ್ಯಗಳನ್ನು ನಂತರ ತಾಜಾ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಿಂದ ಸುಮಾರು 5 ಮಿಲಿ ಮೆಸೆರೇಟೆಡ್ ಮೈಸಿಲಿಯಾದೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಲಾಯಿತುಬಿ. ಕುಕೀLSLP18 ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 2 ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಬಿಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿ 3 ದಿನಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು ಅಲುಗಾಡಿಸುತ್ತದೆ.2 ವಾರಗಳ ನಂತರ, ಶಿಲೀಂಧ್ರದಿಂದ ಮುತ್ತಿಕೊಂಡಿರುವ ಬೇಳೆ ಕಾಳುಗಳನ್ನು ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ ನಂತರ 4 °C ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಫೀಲ್ಡ್ ಇನಾಕ್ಯುಲೇಷನ್ ತನಕ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇಡೀ ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕೆ ಅದೇ ಇನಾಕ್ಯುಲಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ವರ್ಷವೂ ತಾಜಾ ಮಾಡಲಾಗಿತ್ತು.ಇನಾಕ್ಯುಲೇಷನ್‌ಗಾಗಿ, 6-10 ಸೋಂಕಿತ ಧಾನ್ಯಗಳನ್ನು 4-5 ವಾರದ ಮುಸುಕಿನ ಜೋಳದ ಗಿಡಗಳ ಸುಳಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು.ಈ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಬೀಜಕಗಳು ಒಂದು ವಾರದೊಳಗೆ ಯುವ ಸೋರ್ಗಮ್ ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಸೋಂಕನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದವು.

ಬೀಜ ತಯಾರಿಕೆ

ಸೋರ್ಗಮ್ ಬೀಜವನ್ನು ಹೊಲದಲ್ಲಿ ನೆಡುವ ಮೊದಲು ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕ, ಕೀಟನಾಶಕ ಮತ್ತು ~ 1% ಸ್ಪೈರಾಟೊ 480 ಎಫ್ಎಸ್ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕ, 4% ಸೆಬ್ರಿಂಗ್ 480 ಎಫ್ಎಸ್ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕ, 3% ಸೋರ್ಪ್ರೋ 940 ಇಎಸ್ ಸೀಡ್ ಸೇಫ್ನರ್ ಹೊಂದಿರುವ ಸೇಫ್ನರ್ ಮಿಶ್ರಣದಿಂದ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಬೀಜಗಳನ್ನು 3 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಬೀಜಗಳ ಸುತ್ತಲೂ ಈ ಮಿಶ್ರಣದ ತೆಳುವಾದ ಲೇಪನವನ್ನು ಒದಗಿಸಿತು.ಸೇಫ್ನರ್ ಡ್ಯುಯಲ್ ಮ್ಯಾಗ್ನಮ್ ಎಂಬ ಸಸ್ಯನಾಶಕವನ್ನು ಪೂರ್ವ-ಹೊರಹೊಮ್ಮುವ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಾಗಿ ಬಳಸಲು ಅನುಮತಿಸಿತು.

ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಲೀಫ್ ಸ್ಪಾಟ್ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ

ಜೂನ್ 14–15 2017 ಮತ್ತು ಜೂನ್ 20, 2018 ರಂದು ಕ್ಲೇಟನ್, NC ಯಲ್ಲಿನ ಕೇಂದ್ರ ಬೆಳೆಗಳ ಸಂಶೋಧನಾ ಕೇಂದ್ರದಲ್ಲಿ SCP ಅನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಸಂಪೂರ್ಣ ಬ್ಲಾಕ್ ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಎರಡು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರತಿಕೃತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ನೆಡಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿ ಪ್ಲಾಟ್‌ಗೆ 10 ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ 0.9 ಮೀ ಸಾಲು ಅಗಲದೊಂದಿಗೆ 1.8 ಮೀ ಏಕ ಸಾಲುಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನೆಡಲಾಗಿದೆ.ಅಂಚಿನ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಪ್ರತಿ ಪ್ರಯೋಗದ ಪರಿಧಿಯ ಸುತ್ತಲೂ ಎರಡು ಗಡಿ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ನೆಡಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಜುಲೈ 20, 2017 ಮತ್ತು ಜುಲೈ 20, 2018 ರಂದು ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸೋರ್ಗಮ್ ಸಸ್ಯಗಳು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಹಂತದಲ್ಲಿ 3 ಆಗಿತ್ತು. ಒಂದರಿಂದ ಒಂಬತ್ತು ಮಾಪಕಗಳಲ್ಲಿ ರೇಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ರೋಗದ ಚಿಹ್ನೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸದ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಒಂಬತ್ತು ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸ್ಕೋರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಸತ್ತ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಒಂದಾಗಿ ಸ್ಕೋರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.2017 ರಲ್ಲಿ ಎರಡು ರೇಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 2018 ರಲ್ಲಿ ನಾಲ್ಕು ರೀಡಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ ವರ್ಷ ಇನಾಕ್ಯುಲೇಷನ್ ಮಾಡಿದ ಎರಡು ವಾರಗಳ ನಂತರ ಪ್ರಾರಂಭವಾಗುತ್ತದೆ.sAUDPC (ರೋಗದ ಪ್ರಗತಿಯ ಕರ್ವ್ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪ್ರದೇಶ) ಅನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.