ಜಾಗತಿಕ ಆಹಾರ ಕೊರತೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸುವಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ವಾಹಕಗಳಿಂದ ಹರಡುವ ಮಾನವ ರೋಗಗಳನ್ನು ಎದುರಿಸುವಲ್ಲಿ ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕೀಟನಾಶಕ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಸಮಸ್ಯೆಗೆ ತುರ್ತಾಗಿ ಬಳಕೆಯಾಗದ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರದ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಕೀಟಗಳ ಅಸ್ಥಿರ ಗ್ರಾಹಕ ಸಂಭಾವ್ಯತೆ (TRPV) ಚಾನಲ್ಗಳು - ನಾನ್ಜಾಂಗ್ (ನ್ಯಾನ್) ಮತ್ತು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ (ಐಎವ್) - ಭಿನ್ನಲಿಂಗೀಯ ಚಾನಲ್ಗಳನ್ನು (ನ್ಯಾನ್-ಐಎವ್) ರೂಪಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಕೀಟಗಳಲ್ಲಿ ಜಿಯೋಟ್ರೋಪಿಸಮ್, ಶ್ರವಣ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಪ್ರಿಯೋಸೆಪ್ಷನ್ಗೆ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುವ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಸಂವೇದನಾ ಅಂಗಗಳಿಗೆ ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಬಹುದು. ಅಫಿಡೋಪಿರೋಲಿಡೋನ್ (AP) ನಂತಹ ಕೆಲವು ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ಅಜ್ಞಾತ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ಮೂಲಕ ನಾನ್-ಐಎವ್ ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುತ್ತವೆ. AP ಚುಚ್ಚುವ-ಹೀರುವ ಕೀಟಗಳ (ಹೆಮಿಪ್ಟೆರಾನ್ಗಳು) ವಿರುದ್ಧ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ, ತಂತುಗಳ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಆಹಾರವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. AP ನ್ಯಾನ್ಗೆ ಮಾತ್ರ ಬಂಧಿಸಬಹುದು, ಆದರೆ ನ್ಯಾನ್-ಐಎವ್ ಮಾತ್ರ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ (NAM) ಸೇರಿದಂತೆ ಅಗೋನಿಸ್ಟ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಚಾನಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. ಕೀಟನಾಶಕ ಗುರಿಯಾಗಿ ನಾನ್-ಐಎವ್ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ಅದರ ಚಾನಲ್ ಜೋಡಣೆ, ನಿಯಂತ್ರಕ ಬಂಧಕ ತಾಣಗಳು ಮತ್ತು Ca2+-ಅವಲಂಬಿತ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಬಗ್ಗೆ ಹೆಚ್ಚು ತಿಳಿದಿಲ್ಲ, ಇದು ಮತ್ತಷ್ಟು ಕೀಟನಾಶಕ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಅಡ್ಡಿಯಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಕ್ಯಾಲ್ಮೊಡ್ಯುಲಿನ್-ಲಿಗಂಡ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಮಿಪ್ಟೆರಾ ಕೀಟಗಳಲ್ಲಿ ನ್ಯಾನ್-ಇಯಾವ್ನ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕ್ರಯೋ-ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಜೊತೆಗೆ ಆಂಕೈರಿನ್ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಡೊಮೇನ್ (ARD) ನ ಗಡಿಯಲ್ಲಿ AP ಮತ್ತು NAM ನೊಂದಿಗೆ. ಆಶ್ಚರ್ಯಕರವಾಗಿ, ನ್ಯಾನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ವತಃ ಪೆಂಟಾಮರ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಇದು AP-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ARD ಸಂವಹನಗಳಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ಮತ್ತು ಅಗೋನಿಸ್ಟ್ಗಳು ಮತ್ತು ನ್ಯಾನ್-ಇಯಾವ್ ನಡುವಿನ ಆಣ್ವಿಕ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಚಾನಲ್ ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಜೋಡಣೆಯಲ್ಲಿ ARD ಯ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು Ca2+ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸುತ್ತದೆ.
ಜಾಗತಿಕ ಹವಾಮಾನ ಬದಲಾವಣೆ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಹಿನ್ನೆಲೆಯಲ್ಲಿ, ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತಿರುವ ಜಾಗತಿಕ ಆಹಾರ ಭದ್ರತೆಯು 21 ನೇ ಶತಮಾನದ ಪ್ರಮುಖ ಸವಾಲುಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದ್ದು, ಸಮಾಜಕ್ಕೆ ಭೀಕರ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಬೀರುತ್ತಿದೆ.೧,೨ವಿಶ್ವ ಆರೋಗ್ಯ ಸಂಸ್ಥೆಯ ಆಹಾರ ಭದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶದ ಸ್ಥಿತಿ 2023 (SOFI) ವರದಿಯು ಅಂದಾಜಿನ ಪ್ರಕಾರ, ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ ಸುಮಾರು 2.33 ಶತಕೋಟಿ ಜನರು ಮಧ್ಯಮದಿಂದ ತೀವ್ರ ಆಹಾರ ಅಭದ್ರತೆಯಿಂದ ಬಳಲುತ್ತಿದ್ದಾರೆ, ಇದು ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗಿದೆ.3,4ದುರದೃಷ್ಟವಶಾತ್, ಕೀಟಗಳು ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕಗಳಿಂದ ವಾರ್ಷಿಕವಾಗಿ ಸುಮಾರು 20% ರಿಂದ 30% ಅಥವಾ ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಬೆಳೆ ಇಳುವರಿ ನಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಾಗತಿಕ ತಾಪಮಾನ ಏರಿಕೆಯು ಕೀಟ ನಿರೋಧಕತೆ ಮತ್ತು ಬೆಳೆ ದುರ್ಬಲತೆಯನ್ನು ಉಲ್ಬಣಗೊಳಿಸುವ ನಿರೀಕ್ಷೆಯಿದೆ.4,5,6,7,8ಕೀಟನಾಶಕ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯು ಬೆಳೆಗಳನ್ನು ಕೀಟಗಳಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಲು ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕಗಳಿಂದ ಹರಡುವ ರೋಗಕಾರಕಗಳ ಹರಡುವಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗುತ್ತಿರುವ ಡೆಂಗ್ಯೂ ಜ್ವರ, ಮಲೇರಿಯಾ ಮತ್ತು ಚಾಗಸ್ ಕಾಯಿಲೆಯಂತಹ ರೋಗಕಾರಕಗಳಿಂದ ಹರಡುವ ಮಾನವ ರೋಗಗಳನ್ನು ಎದುರಿಸಲು ಸಹ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.5,9,10,11
ನರವಿಷಕಾರಿ ಕೀಟನಾಶಕಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಗುರಿಗಳಲ್ಲಿ, ಹೆಟೆರೊಟೆಟ್ರಾಮೆರಿಕ್ TRPV ಚಾನೆಲ್ ನಾಂಚುಂಗ್ (ನ್ಯಾನ್)-ಇನ್ಯಾಕ್ಟಿವ್ (ಐಎವಿ) ಕಳೆದ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಪತ್ತೆಯಾದ ಕೀಟನಾಶಕ ಗುರಿಗಳ ವರ್ಗವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಇಮಿಡಾಕ್ಲೋಪ್ರಿಡ್ ಮತ್ತು ಪೈರಾಕ್ಲೋಸ್ಟ್ರೋಬಿನ್ ಸೇರಿವೆ.12,13,14ಅರೆ-ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಕೀಟನಾಶಕ ಅಫಿಡೋಪೈರೋಲಿಫೆನ್ (AP) ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಮತ್ತು ವಾಣಿಜ್ಯೀಕರಿಸಿದ ಉತ್ಪನ್ನವಾಗಿದ್ದು, ಇದರ ಮುಖ್ಯ ಅಂಶವೆಂದರೆ ಸಕ್ರಿಯ ಕೀಟನಾಶಕ ಇನ್ಸ್ಕಾಲಿಸ್®, ಇದು AP ಅನ್ನು ಸಬ್ನ್ಯಾನೊಮೋಲಾರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.15ಪರಾಗಸ್ಪರ್ಶಕಗಳು, ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ಕೀಟಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಗುರಿಯಿಲ್ಲದ ಜೀವಿಗಳಿಗೆ AP ಕಡಿಮೆ ತೀವ್ರವಾದ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಲೇಬಲ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಬಳಸಿದಾಗ, ಇದು ಇತರ ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.16,17,18ನ್ಯಾನ್ ಮತ್ತು ಐಯಾವ್ ಕೀಟ ಪ್ರಭೇದಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ, ಆಂಟೆನಾಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಗಳ ಸ್ವರಮೇಳದ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಗ್ರಾಹಕ ನರಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಸಹ-ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಶ್ರವಣ, ಗುರುತ್ವಾಕರ್ಷಣೆಯ ಗ್ರಹಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಪ್ರಿಯೋಸೆಪ್ಷನ್ಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿವೆ.13,16,19,20,21,22ಎಪಿ, ಇಮಿಡಾಕ್ಲೋಪ್ರಿಡ್ ಮತ್ತು ಪೈರಾಕ್ಲೋಸ್ಟ್ರೋಬಿನ್ ನ್ಯಾನ್-ಐಎವ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಮೂಲಕ ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಪ್ರೊಪ್ರಿಯೋಸೆಪ್ಟಿವ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.13,16,23ಗಿಡಹೇನುಗಳು ಮತ್ತು ಬಿಳಿ ನೊಣಗಳಂತಹ ಚುಚ್ಚುವ-ಹೀರುವ ಕೀಟಗಳಲ್ಲಿ (ಹೆಮಿಪ್ಟೆರಾನ್ಗಳು), ಪ್ರೊಪ್ರಿಯೋಸೆಪ್ಷನ್ ನಷ್ಟವು ಅವುಗಳ ಆಹಾರ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಕುಂಠಿತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.13,24ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, AP ನಾನ್-ಇಯಾವ್ ಸಂಕೀರ್ಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಮತ್ತು ನಾನ್ ಗೆ ಮಾತ್ರ ಕಡಿಮೆ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. AP ಅನ್ನು ನಾನ್-ಇಯಾವ್ ಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದರಿಂದ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರವಾಹ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ನಾನ್ ಗೆ ಮಾತ್ರ ಬಂಧಿಸುವುದರಿಂದ ಚಾನಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಐಯಾವ್ ಸ್ವತಃ AP ಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದಿಲ್ಲ.16ಇದು ನಾನ್ ಮತ್ತು ನಾನ್ ಐವ್ ವಿಭಿನ್ನ ನಾನ್-ಐವ್ ಚಾನಲ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಬಂಧಿಸಬಹುದು (ಉದಾ., ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಟೊಚಿಯೊಮೆಟ್ರಿಕ್ ಅನುಪಾತಗಳು ಅಥವಾ ಒಂದೇ ಸ್ಟೊಚಿಯೊಮೆಟ್ರಿಕ್ ಅನುಪಾತದೊಳಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳೊಂದಿಗೆ) ಅಥವಾ ಎಪಿ ಬಹು ತಾಣಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನೈಸರ್ಗಿಕ ಅಗೋನಿಸ್ಟ್ ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ (NAM) ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ನಾನ್-ಐವ್ಗೆ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಸಂಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇನ್ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಗಿಡಹೇನುಗಳ (AP)ಂತೆಯೇ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.16,25ಮತ್ತು ಗಿಡಹೇನುಗಳ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಮತ್ತು ಆಹಾರವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಅವುಗಳ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.25,26. ಈ ದತ್ತಾಂಶಗಳು ಹಲವು ಪ್ರಶ್ನೆಗಳನ್ನು ಹುಟ್ಟುಹಾಕುತ್ತವೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ನ್ಯಾನ್-ಐವ್ ಹೆಟೆರೊಡೈಮರ್ ಹೇಗೆ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಲು ಯಾವ ಬಂಧಿಸುವ ತಾಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಈ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳು ಪ್ರೊಪ್ರಿಯೋಸೆಪ್ಷನ್ ಅನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ಮೂಲಕ ಚಾನಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಹೇಗೆ ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನ್ಯಾನ್ ಸ್ವತಃ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿರಲು ಮತ್ತು AP ಗೆ ಕಡಿಮೆ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಕಾರಣಗಳು, ಆದರೆ ನ್ಯಾನ್-ಐವ್ ಹೆಟೆರೊಡೈಮರ್ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು AP ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ನ್ಯಾನ್-ಐವ್ ಕಾರ್ಯದ Ca2+-ಅವಲಂಬಿತ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ನರಕೋಶದ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಹೇಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದರ ಬಗ್ಗೆ ಸ್ವಲ್ಪವೇ ತಿಳಿದಿಲ್ಲ.13,21. 13,21.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಕ್ರಯೋ-ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫಿಸಿಯಾಲಜಿ ಮತ್ತು ರೇಡಿಯೊಲಿಗಂಡ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸಿ, ನಾವು ನ್ಯಾನ್-ಐಎವ್ನ ಜೋಡಣೆ ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಅಣು ನಿಯಂತ್ರಕಗಳಿಗೆ ಅದರ ಬಂಧನದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನಾವು ಐಎವ್ ಮತ್ತು ಎಪಿ-ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ನ್ಯಾನ್ ಪೆಂಟಾಮರ್ಗಳಿಗೆ ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬಂಧಿತವಾಗಿರುವ ಕ್ಯಾಲ್ಮೊಡ್ಯುಲಿನ್ (CaM) ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಚಾನಲ್ಗಳಲ್ಲಿನ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಅಯಾನುಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಚಾನಲ್ ಅಸೆಂಬ್ಲಿ ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಅಂಶಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ. ಹೆಚ್ಚು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ARD ಕೇಂದ್ರ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ದೃಢಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಸಂಬಂಧಿತ ಕೃಷಿ ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ ಸಂಪೂರ್ಣ ಕೀಟ ಚಾನಲ್ಗಳ ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನ.27, 28, 29ಕೀಟನಾಶಕ ಉದ್ಯಮದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ನಿರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ, ಕೀಟನಾಶಕಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಾಗತಿಕ ಆಹಾರ ಭದ್ರತೆ ಮತ್ತು ವಾಹಕ-ಹರಡುವ ರೋಗಗಳ ಹರಡುವಿಕೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಇತರ ಪ್ರಭೇದಗಳಿಗೆ TRPV-ಉದ್ದೇಶಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ.
ನಾನ್-ಐವ್ ಅನ್ನು Ca2+ ನಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬಂಧಿತ CaM ನಿಂದ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, CaM ನಿಂದ Nav ನ ಈ Ca2+-ಅವಲಂಬಿತ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಇತರ ಅಯಾನು ಚಾನಲ್ಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ (ಉದಾ, ವೋಲ್ಟೇಜ್-ಗೇಟೆಡ್ Na+ ಚಾನಲ್ಗಳು ಮತ್ತು TRPV5/6 ಚಾನಲ್ಗಳು)೫೨,೫೩,೫೪,೫೫,೫೬,೫೭. Nav1.2 ಚಾನಲ್ನಲ್ಲಿ, CaM ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ (CTD) ನೊಂದಿಗೆ ಸುರುಳಿಯಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು Ca2+ ಅದರ N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ನ CTD ಯ ದೂರದ ಭಾಗಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ.56. TRPV5/6 ಚಾನಲ್ನಲ್ಲಿ, CaM ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ CTH ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು Ca2+ ಅದರ N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ನ ರಂಧ್ರದೊಳಗೆ ಮೇಲ್ಮುಖ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಕ್ಯಾಟಯಾನು ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.53,54. ನಾನ್-ಐಯಾವ್-ಸಿಎಎಮ್ ನ Ca2+-ನಿಯಂತ್ರಿತ ಕಾರ್ಯಕ್ಕಾಗಿ ನಾವು ಒಂದು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸುತ್ತೇವೆ (ಚಿತ್ರ 4h). ಈ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ, CaM ನ N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ Iav ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ (CTH) ಗೆ ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ (ಕಡಿಮೆ [Ca2+] ಸಾಂದ್ರತೆ), CaM ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ ನಾನ್ ಜೊತೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ, ARD ರಚನೆಯನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆ ಮೂಲಕ ಚಾನಲ್ ತೆರೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ. ಚಾನಲ್ಗೆ ಅಗೋನಿಸ್ಟ್/ಕೀಟನಾಶಕವನ್ನು ಬಂಧಿಸುವುದರಿಂದ ರಂಧ್ರ ತೆರೆಯುವಿಕೆ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು Ca2+ ಒಳಹರಿವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ Ca2+ CaM ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ನಾನ್ನ ARD ನಿಂದ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಡೊಮೇನ್ನ ವಿಘಟನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. CaM ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುವುದು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ Ca2+ ನ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸುವುದರಿಂದ, ಈ ವಿಘಟನೆಯು ARD ಚಲನಶೀಲತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ Ca2+-ಅವಲಂಬಿತ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಅಥವಾ ಸಂವೇದನಾಶಕತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಅಯಾನ್ ಎಲ್ಯೂಷನ್ ನಂತರ ಚಾನಲ್ ಪ್ರವಾಹಗಳ ತ್ವರಿತ ಚೇತರಿಕೆ (ಚಿತ್ರ 4g) ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು Ca2+-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ನರಕೋಶ ಸಂಕೇತಗಳಿಗೆ ತ್ವರಿತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಇನ್ನೂ ಸರಿಯಾಗಿ ಅರ್ಥವಾಗದ ಐಯಾವ್ನ ಸಿ-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಪ್ರದೇಶವು ಚಾನಲ್ ಗುರಿ ಮತ್ತು ಪ್ರಸ್ತುತ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಇತರ ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ.21
ಕೊನೆಯದಾಗಿ, ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನವು ಕೃಷಿ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯ ಕೀಟನಾಶಕ-ಕೀಟನಾಶಕ TRP ಚಾನಲ್ ಸಂಕೀರ್ಣದ ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸುತ್ತದೆ - ಇದು ನಮಗೆ ಹಿಂದೆ ತಿಳಿದಿಲ್ಲದ ಆವಿಷ್ಕಾರ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಕೀಟ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ, ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (HEK293S GnTi–) ಕೀಟ ಚಾನಲ್ನ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಾವು ನಿರೂಪಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಕೀಟನಾಶಕ ಪ್ರತಿರೋಧ ಮತ್ತು ಆಹಾರ ಭದ್ರತೆ ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕಗಳ ಮೇಲೆ ನಡೆಯುತ್ತಿರುವ ಒತ್ತಡದ ಹಿನ್ನೆಲೆಯಲ್ಲಿ, ನಮ್ಮ ಕೆಲಸವು ಮಾನವನ ಆರೋಗ್ಯ ಮತ್ತು ಜಾಗತಿಕ ಆಹಾರ ಭದ್ರತೆಯ ಪ್ರಯೋಜನಕ್ಕಾಗಿ ಹೊಸ ಕೀಟನಾಶಕಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಲೇಬಲ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಬಳಸಿದಾಗ AP ನಂತಹ ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ಕೆಲವು ಕೀಟಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ಪರಾಗಸ್ಪರ್ಶಕಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ತೀವ್ರವಾದ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಅವುಗಳ ಪರಿಸರ ಸುರಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.13,16ಇದಲ್ಲದೆ, ಸೊಳ್ಳೆಗಳ ಮೇಲೆ ಕೆಲವು AP ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಅವು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಹಾರುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಈ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟಿಂಗ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ನ್ಯಾನ್-ಇಯಾವ್ಗೆ ಹೇಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಮಾರ್ಪಾಡು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವಕ್ಕಾಗಿ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಅನುಕೂಲವಾಗುತ್ತದೆ.ನಿಖರವಾದಕೀಟ ನಿಯಂತ್ರಣ. ನ್ಯಾನ್-ಇಯಾವ್ ARD ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು, ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ಮತ್ತು Ca2+-CaM ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಚಾನಲ್ ಜೋಡಣೆಗೂ ಸಹ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನವು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೆಟೆರೊಡೈಮರ್ ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವುದು ಅಯಾನು ಚಾನಲ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಒಂದು ಅನನ್ಯ ಮತ್ತು ಭರವಸೆಯ ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಸೂಚಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಎಂಟು ಆರ್ಥೋಲಾಜಸ್ ಜೀನ್ಗಳಲ್ಲಿ, ಕಂದು ಜೀರುಂಡೆ (ಹ್ಯಾಲಿಯೊಮಾರ್ಫಾ ಹ್ಯಾಲಿಸ್) ನಾಂಚಂಗ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಆಕ್ಟಿವ್ನ ಪೂರ್ಣ-ಉದ್ದದ ಜೀನ್ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಜೀನ್ಗಳನ್ನು ಮಾನವ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗಾಗಿ ಕೋಡಾನ್-ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು XhoI ಮತ್ತು EcoRI ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಸೈಟ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು pBacMam pCMV-DEST ವೆಕ್ಟರ್ (ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ಗೆ ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಇದು ಕ್ಲೋನ್ಗಳು C-ಟರ್ಮಿನಲ್ GFP-FLAG-10xHis ಮತ್ತು mCherry-FLAG-10xHis ಟ್ಯಾಗ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಫ್ರೇಮ್ನಲ್ಲಿವೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿತು, ಇವು HRC-3C ಪ್ರೋಟೀಸ್ (PPX) ನಿಂದ ಸೀಳಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ, ಇದು ಸ್ವತಂತ್ರಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ. ನಾಂಚುಂಗ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಯಾಕ್ಟಿವ್ ಅನ್ನು pBacMam ವೆಕ್ಟರ್ಗೆ ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಲು ಬಳಸಿದ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿವೆ:
K3 ಕ್ಯಾಮೆರಾ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಟನ್ ಬಯೋಕ್ವಾಂಟಮ್ ಎನರ್ಜಿ ಫಿಲ್ಟರ್ ಹೊಂದಿದ ಟೈಟಾನ್ ಕ್ರಿಯೋಸ್ G2 ಟ್ರಾನ್ಸ್ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (FEI) ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಣಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು 300 keV ನಲ್ಲಿ, 20 eV ಶಕ್ತಿಯ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್, 1.08 Å/ಪಿಕ್ಸೆಲ್ ಮಾದರಿ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ ಗಾತ್ರ (81,000x ನ ನಾಮಮಾತ್ರ ವರ್ಧನೆ) ಮತ್ತು -0.8 ರಿಂದ -2.2 μm ವರೆಗಿನ ಡಿಫೋಕಸ್ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ನೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು. 25 e–px−1 s−1 ನ ನಾಮಮಾತ್ರ ಡೋಸ್ ದರ, 2.4 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಮಾನ್ಯತೆ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಸರಿಸುಮಾರು 60 e–Å−2 ಒಟ್ಟು ಡೋಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಲ್ಯಾಟಿಟ್ಯೂಡ್ S ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಗ್ಯಾಟನ್) ಬಳಸಿ ಸೆಕೆಂಡಿಗೆ 40 ಫ್ರೇಮ್ಗಳಲ್ಲಿ ವೀಡಿಯೊ ರೆಕಾರ್ಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
RELION 4.061 ರಲ್ಲಿ MotionCor2 ಬಳಸಿ ಫಿಲ್ಮ್ನಲ್ಲಿ ಬೀಮ್-ಪ್ರೇರಿತ ಚಲನೆಯ ತಿದ್ದುಪಡಿ ಮತ್ತು ಡೋಸ್ ವೇಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಪ್ಯಾಚ್-ಆಧಾರಿತ CTF ಅಂದಾಜು ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕ್ರಯೋಸ್ಪ್ಯಾರಕ್ನಲ್ಲಿ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರ್ ಫಂಕ್ಷನ್ (CTF) ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಅಂದಾಜನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು62. CTF ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ≥4 Å ಹೊಂದಿರುವ ಫೋಟೊಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್ಗಳನ್ನು ನಂತರದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಹೊರಗಿಡಲಾಗಿದೆ. ವಿಶಿಷ್ಟವಾಗಿ, ಕ್ರಯೋಸ್ಪ್ಯಾರಕ್ನಲ್ಲಿ ಪಾಯಿಂಟ್ ಆಯ್ಕೆಗಾಗಿ 500–1000 ಫೋಟೊಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್ಗಳ ಉಪವಿಭಾಗವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್-ಆಧಾರಿತ ಕಣ ಆಯ್ಕೆಗಾಗಿ ಸ್ಪಷ್ಟ ಉಲ್ಲೇಖ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ 2D ವರ್ಗೀಕರಣದ ಹಲವಾರು ಸುತ್ತುಗಳನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ 64-ಪಿಕ್ಸೆಲ್ ಬೌಂಡಿಂಗ್ ಬಾಕ್ಸ್ಗಳು ಮತ್ತು 4-ಫೋಲ್ಡ್ ಬಿನ್ನಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ಕಣಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. ಅನಗತ್ಯ ಕಣ ವರ್ಗಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು 2D ವರ್ಗೀಕರಣದ ಹಲವಾರು ಸುತ್ತುಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಆರಂಭಿಕ 3D ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅಬ್ ಇನಿಶಿಯೋ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕ್ರಯೋಸ್ಪ್ಯಾರಕ್ನಲ್ಲಿ ಏಕರೂಪದ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪರಿಷ್ಕರಿಸಲಾಯಿತು. ARD ವೈವಿಧ್ಯತೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಕ್ರಯೋಸ್ಪ್ಯಾರಕ್ ಅಥವಾ RELION ನಲ್ಲಿ 3D ವರ್ಗೀಕರಣವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಮೆಂಬರೇನ್ ಡೊಮೇನ್ಗಳ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ. ಕಣಗಳನ್ನು C1 ಮತ್ತು C2 ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಯಿತು; ಹೆಚ್ಚಿನ C2 ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಕಣಗಳನ್ನು C2 ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಸಮ್ಮಿತೀಯವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೇಸಿಯನ್ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಗಾಗಿ RELION ಗೆ ಆಮದು ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಕಣಗಳನ್ನು ಅಂತಿಮ ಅಸಮ ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಯ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಗಾಗಿ ಕ್ರಯೋಸ್ಪಾರ್ಕ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ಅಂತಿಮ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮತ್ತು ಕಣ ಎಣಿಕೆಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
Nan+AP ಪೆಂಟಾಮರ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೊಳಿಸುವಾಗ, ಸಿಗ್ನಲ್ ವ್ಯವಕಲನ ಮತ್ತು TMD ಮರೆಮಾಚುವಿಕೆಯಂತಹ ಮೆಂಬರೇನ್ ಡೊಮೇನ್ಗಳ (ವಿಶೇಷವಾಗಿ ರಂಧ್ರ ಪ್ರದೇಶ) ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ನಾವು ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ರಂಧ್ರ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿನ ಸಂಭಾವ್ಯ ತೀವ್ರ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆ ಮತ್ತು TMD ಯ ಒಟ್ಟಾರೆ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯಿಂದಾಗಿ ಈ ಪ್ರಯತ್ನಗಳು ವಿಫಲವಾದವು. ಕ್ರಯೋಸ್ಪಾರ್ಕ್ನಲ್ಲಿ ಏಕರೂಪವಲ್ಲದ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ವಿಧಾನದಿಂದ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಮುಖವಾಡವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಂತಿಮ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು, ಇದು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ARD ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಿಕೊಂಡಿತು. ಇದು ಮೆಂಬರೇನ್ ಡೊಮೇನ್ಗಳಿಗಿಂತ (ವಿಶೇಷವಾಗಿ VSLD ಪ್ರದೇಶ) ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಿತು.
ನಾಂಚಂಗ್ ಮತ್ತು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ದೋಷಗಳ ಅಪೋ ರೂಪಗಳ ಆರಂಭಿಕ ಡಿ ನೊವೊ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮೊದಲು ಕೂಟ್63 ಬಳಸಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ-ವಿಶ್ವಾಸ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ನ್ಯಾನ್ ಮತ್ತು ಐಯಾವ್ ದೋಷಗಳ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್264 ಬಳಸಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಯಿತು. ಕ್ಯಾಲ್ಮೊಡ್ಯುಲಿನ್ ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ PDB ಪ್ರವೇಶಗಳು 4JPZ56 ಮತ್ತು 1CFD65 ನಲ್ಲಿ Ca2+-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು Ca2+-ಮುಕ್ತ ಮಾದರಿಗಳ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಿನ-ದೇಹದ ಫಿಟ್ಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಸರಿಯಾದ ಸ್ಟೀರಿಯೊಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಜ್ಯಾಮಿತಿಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಗೋಳಾಕಾರದ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪರಿಷ್ಕರಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಫಾಸ್ಫಾಟಿಡಿಲ್ಕೋಲಿನ್, ಫಾಸ್ಫಾಟಿಡಿಲೆಥೆನೋಲಮೈನ್ ಮತ್ತು ಫಾಸ್ಫಾಟಿಡಿಲ್ಸೆರಿನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾದ ಲಿಪಿಡ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಾಗಿ ರೂಪಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು NAM ಮತ್ತು AP ಲಿಗಂಡ್ಗಳನ್ನು ಬಿಗಿಯಾದ ಜಂಕ್ಷನ್ಗಳಲ್ಲಿ ಅನುಗುಣವಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. PHENIX66 ನಲ್ಲಿ eLBOW ಬಳಸಿ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ಗಳ SMILES ಸ್ಟ್ರಿಂಗ್ನಿಂದ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಫೈಲ್ಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಯಿತು. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸ್ಥಳೀಯ ಗ್ರಿಡ್ ಹುಡುಕಾಟ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆ ನಿರ್ಬಂಧಗಳೊಂದಿಗೆ ಜಾಗತಿಕ ಕನಿಷ್ಠೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು PHENIX ನಲ್ಲಿ ನೈಜ ಜಾಗದಲ್ಲಿ ಪರಿಷ್ಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಾದರಿ ಪರಿಷ್ಕರಣೆ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ MolProbity ಸರ್ವರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು PyMOL ಮತ್ತು UCSF Chimera X ಬಳಸಿ ವಿವರಣೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು. 67,68,69 HOLE ಸರ್ವರ್ ಬಳಸಿ ಅಪರ್ಚರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು, 70 ಮತ್ತು Consurf ಸರ್ವರ್ ಬಳಸಿ ಅನುಕ್ರಮ ಸಂರಕ್ಷಣಾ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು.71
ಇಗೋರ್ ಪ್ರೊ 6.2, ಎಕ್ಸೆಲ್ ಆಫೀಸ್ 365 ಮತ್ತು ಗ್ರಾಫ್ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ 7.0 ಬಳಸಿ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ದೋಷ (SEM) ಎಂದು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎರಡು ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು (ಎರಡು-ಬಾಲದ, ಜೋಡಿಯಾಗದ) ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಬಹು ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ಡನೆಟ್ನ ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ನಂತರ ಏಕಮುಖ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ANOVA) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. *P< 0.05, ** ಪಿ< 0.01, ಮತ್ತು ***Pಡೇಟಾ ವಿತರಣೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ < 0.001 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. Kd, Ki ಮೌಲ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅಸಮಪಾರ್ಶ್ವದ 95% ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಮಧ್ಯಂತರಗಳನ್ನು ಗ್ರಾಫ್ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸಂ 10 ಬಳಸಿ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.
ಅಧ್ಯಯನ ವಿಧಾನದ ಕುರಿತು ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿವರಗಳಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಈ ಲೇಖನದಲ್ಲಿ ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಲಾದ ನೇಚರ್ ಪೋರ್ಟ್ಫೋಲಿಯೋ ವರದಿ ಸಾರಾಂಶವನ್ನು ನೋಡಿ.
ಆರಂಭಿಕ ಮಾದರಿಯನ್ನು PDB 4JPZ ಮತ್ತು 1CFD ಡೇಟಾಬೇಸ್ಗಳಿಂದ ಕ್ಯಾಲ್ಮೊಡ್ಯುಲಿನ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ. ನಿರ್ದೇಶಾಂಕಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೇಟಾ ಬ್ಯಾಂಕ್ (PDB) ನಲ್ಲಿ 9NVN (ಲಿಗಂಡ್ ಇಲ್ಲದ Nan-Iav-CaM), 9NVO (ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ Nan-Iav-CaM), 9NVP (ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ ಮತ್ತು EDTAಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ Nan-Iav-CaM), 9NVQ (ಅಫೆನಿಡಾಲ್ಪಿರೋಲಿನ್ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ Nan-Iav-CaM), 9NVR (ಅಫೆನಿಡಾಲ್ಪಿರೋಲಿನ್ ಮತ್ತು EDTAಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ Nan-Iav-CaM), ಮತ್ತು 9NVS (ಅಫೆನಿಡಾಲ್ಪಿರೋಲಿನ್ಗೆ ಬದ್ಧವಾಗಿರುವ Nan ಪೆಂಟಾಮರ್) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಠೇವಣಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಅನುಗುಣವಾದ ಕ್ರಯೋ-ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಡೇಟಾಬೇಸ್ (EMDB) ನಲ್ಲಿ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪ್ರವೇಶ ಸಂಖ್ಯೆಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ: EMD-49844 (ಲಿಗಂಡ್ ಇಲ್ಲದೆ Nan-Iav-CaM), EMD-49845 (ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ ಹೊಂದಿರುವ Nan-Iav-CaM ಸಂಕೀರ್ಣ), EMD-49846 (ನಿಕೋಟಿನಮೈಡ್ ಮತ್ತು EDTA ಹೊಂದಿರುವ Nan-Iav-CaM ಸಂಕೀರ್ಣ), EMD-49847 (ಅಫಿಡೋಪೈರೋಲಿನ್ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಹೊಂದಿರುವ Nan-Iav-CaM ಸಂಕೀರ್ಣ), EMD-49848 (ಅಫಿಡೋಪೈರೋಲಿನ್ ಮತ್ತು EDTA ಹೊಂದಿರುವ Nan-Iav-CaM ಸಂಕೀರ್ಣ), ಮತ್ತು EMD-49849 (ಅಫಿಡೋಪೈರೋಲಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ Nan ಪೆಂಟಾಮರ್ ಸಂಕೀರ್ಣ). ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಕಚ್ಚಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ಈ ಪತ್ರಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಜನವರಿ-28-2026