ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಸ್ಕರಿನಿಕ್ M3 ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಅಲೋಸ್ಟೆರಿಕ್ ಮಾಡ್ಯುಲೇಷನ್ ಮೂಲಕ ಆಂಥೆಲ್ಮಿಂಟಿಕ್ ಔಷಧ N,N-ಡೈಥೈಲ್-m-ಟೊಲುಅಮೈಡ್ (DEET) ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ.

  
ಆಂಥೆಲ್ಮಿಂಟಿಕ್ ಔಷಧ N,N-ಡೈಈಥೈಲ್-m-ಟೊಲುಅಮೈಡ್ (DEET) ACHE (ಅಸೆಟೈಲ್‌ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್) ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅತಿಯಾದ ನಾಳೀಯೀಕರಣದಿಂದಾಗಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಜನಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ಪ್ರಬಂಧದಲ್ಲಿ, DEET ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ. DEET ಪ್ರಸರಣ, ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಸೇರಿದಂತೆ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ NO ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು VEGF ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. M3 ಅನ್ನು ನಿಶ್ಯಬ್ದಗೊಳಿಸುವುದು ಅಥವಾ ಔಷಧೀಯ M3 ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಈ ಎಲ್ಲಾ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸಿತು, DEET-ಪ್ರೇರಿತ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ M3-ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. M3 ಗ್ರಾಹಕಗಳನ್ನು ಅತಿಯಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಮತ್ತು HEK ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರಯೋಗಗಳು, ಹಾಗೆಯೇ ಬಂಧಿಸುವ ಮತ್ತು ಡಾಕಿಂಗ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು, DEET M3 ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಅಲೋಸ್ಟೆರಿಕ್ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟರ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, DEET ACHE ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅಸೆಟೈಲ್‌ಕೋಲಿನ್‌ನ ಜೈವಿಕ ಲಭ್ಯತೆ ಮತ್ತು M3 ಗ್ರಾಹಕಗಳಿಗೆ ಅದರ ಬಂಧನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಲೋಸ್ಟೆರಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೂಲಕ ಪ್ರೊಆಂಜಿಯೋಜೆನಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಇಸಿಗಳನ್ನು ಸ್ವಿಸ್ ಇಲಿಗಳ ಮಹಾಪಧಮನಿಯಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು. ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಕೊಬಯಾಶಿ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ 26 ರಿಂದ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ. ಮುರೈನ್ ಇಸಿಗಳನ್ನು ನಾಲ್ಕನೇ ಪ್ಯಾಸೇಜ್ ವರೆಗೆ 5% ಶಾಖ-ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಎಫ್‌ಬಿಎಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಇಬಿಎಂ-2 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.
HUVEC, U87MG, ಅಥವಾ BF16F10 ನ ಪ್ರಸರಣದ ಮೇಲೆ ಎರಡು ಸಾಂದ್ರತೆಯ DEET ಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು CyQUANT ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಕಿಟ್ (ಆಣ್ವಿಕ ಪ್ರೋಬ್ಸ್, C7026) ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 5.103 ಕೋಶಗಳನ್ನು 96-ಬಾವಿ ತಟ್ಟೆಯಲ್ಲಿ ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಜೋಡಿಸಲು ಅನುಮತಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ DEET ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿದ ನಂತರ, ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ಡೈ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 °C ನಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 485 nm ಪ್ರಚೋದನೆ ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು 530 nm ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಿತ್ರಾಸ್ LB940 ಮಲ್ಟಿಮೋಡ್ ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಬರ್ಥೋಲ್ಡ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಬ್ಯಾಡ್ ವೈಲ್ಡ್‌ಬ್ಯಾಡ್, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.
HUVEC ಅನ್ನು 96-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 104 ಕೋಶಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು DEET ಯೊಂದಿಗೆ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ವರ್ಣಮಾಪನ MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, M5655) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಜೀವಕೋಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. 570 nm ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಮಲ್ಟಿಮೋಡ್ ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಮಿತ್ರಾಸ್ LB940) ನಲ್ಲಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು.
DEET ಯ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅಸ್ಸೇಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. 10-8 M ಅಥವಾ 10-5 M DEET ಯೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು HUVEC ಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಉದ್ದದ ರಚನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 1a, b, ಬಿಳಿ ಪಟ್ಟಿಗಳು). ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, 10-14 ರಿಂದ 10-5 M ವರೆಗಿನ DEET ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಉದ್ದವು 10-8 M DEET ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ಥಭೂಮಿಯನ್ನು ತಲುಪಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S2). 10-8 M ಮತ್ತು 10-5 M ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ DEET ಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ HUVEC ಗಳ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಪ್ರೊಆಂಜಿಯೋಜೆನಿಕ್ ಪರಿಣಾಮದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ.
ನಿಯೋವಾಸ್ಕುಲರೈಸೇಶನ್ ಮೇಲೆ DEET ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ನಾವು ಇನ್ ವಿವೋ ನಿಯೋವಾಸ್ಕುಲರೈಸೇಶನ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ. 14 ದಿನಗಳ ನಂತರ, 10-8 M ಅಥವಾ 10-5 M DEET ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರ್ವ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಡಲಾದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಚುಚ್ಚಿದಾಗ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಅಂಶದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ಚಿತ್ರ 1c, ಬಿಳಿ ಪಟ್ಟಿಗಳು).
ಇದಲ್ಲದೆ, DEET-ಪ್ರೇರಿತ ನಿಯೋವಾಸ್ಕುಲರೈಸೇಶನ್ ಅನ್ನು U87MG ಕ್ಸೆನೋಗ್ರಾಫ್ಟ್ ಹೊಂದಿರುವ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇವುಗಳಿಗೆ 10-5 M ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ DEET ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿದಿನ (ip) ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ಮಾನವರಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ. 23 ರಲ್ಲಿ. U87MG ಕೋಶಗಳನ್ನು ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಮಾಡಿದ 14 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು (ಅಂದರೆ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು >100 mm3) ಕಂಡುಬಂದವು. 28 ನೇ ದಿನದಂದು, ನಿಯಂತ್ರಣ ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ DEET-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 1d, ಚೌಕಗಳು). ಇದಲ್ಲದೆ, ಗೆಡ್ಡೆಗಳ CD31 ಕಲೆಗಳು DEET ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ ಆದರೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ರಕ್ತನಾಳಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. (ಚಿತ್ರ 1e-g).
DETA-ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ರಸರಣದಲ್ಲಿ ಮಸ್ಕರಿನಿಕ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, pFHHSiD (10-7 M, ಆಯ್ದ M3 ಗ್ರಾಹಕ ವಿರೋಧಿ) ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ 10-8 M ಅಥವಾ 10-5 M DETA ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. HUVEC. pFHHSiD ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಎಲ್ಲಾ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ DETA ಯ ಪ್ರಸರಣ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 1).
ಈ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, DEET HUVEC ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಉದ್ದವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಅದೇ ರೀತಿ, pFHHSiD DEET-ಪ್ರೇರಿತ ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಉದ್ದವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 1a, b, ಬೂದು ಪಟ್ಟಿಗಳು). ಇದಲ್ಲದೆ, M3 siRNA ಯೊಂದಿಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ನಿಯಂತ್ರಣ siRNA ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ರಚನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೂ, M3 ಮಸ್ಕರಿನಿಕ್ ಗ್ರಾಹಕವನ್ನು ಮೌನಗೊಳಿಸುವುದರಿಂದ ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಉದ್ದವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ DEET ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 1a, b, ಕಪ್ಪು ಪಟ್ಟಿಗಳು).
ಇದಲ್ಲದೆ, 10-8 M ಅಥವಾ 10-5 M DEET-ಪ್ರೇರಿತ ನಾಳೀಯೀಕರಣ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ನಿಯೋವಾಸ್ಕುಲರೈಸೇಶನ್ ಇನ್ ವಿವೊ ಎರಡನ್ನೂ pFHHSiD ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 1c, d, ವೃತ್ತಗಳು). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು DEET ಆಯ್ದ M3 ಗ್ರಾಹಕ ವಿರೋಧಿಗಳು ಅಥವಾ M3 siRNA ಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುವ ಮಾರ್ಗದ ಮೂಲಕ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ACHE ಎಂಬುದು DEET ನ ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ. ACHE ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಡೋನೆಪೆಜಿಲ್‌ನಂತಹ ಔಷಧಗಳು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ಮೌಸ್ ಹಿಂಡ್‌ಲಿಂಬ್ ಇಷ್ಕೆಮಿಯಾ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ EC ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು. HUVEC ನಲ್ಲಿ ACHE ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ DEET ನ ಎರಡು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ DEET ನ ಕಡಿಮೆ (10-8 M) ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ (10-5 M) ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ACHE ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿವೆ (ಚಿತ್ರ 2).
DEET (10-8 M ಮತ್ತು 10-5 M) ನ ಎರಡೂ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು HUVEC ನಲ್ಲಿ ಅಸೆಟೈಲ್‌ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು. BW284c51 (10-5 M) ಅನ್ನು ಅಸೆಟೈಲ್‌ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ವಾಹನ-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ DEET ನ ಎರಡು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ HUVEC ನಲ್ಲಿನ ACHE ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಶೇಕಡಾವಾರು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಆರು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಸರಾಸರಿ ± SEM ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. *p < 0.05 ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ (ಕ್ರುಸ್ಕಲ್-ವಾಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಡನ್ ಬಹು ಹೋಲಿಕೆ ಪರೀಕ್ಷೆ).
ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ (NO) ಆಂಜಿಯೋಜೆನಿಕ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ 33, ಆದ್ದರಿಂದ, DEET-ಪ್ರಚೋದಿತ HUVEC ಗಳಲ್ಲಿ NO ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ DEET-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ NO ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಯಿತು, ಆದರೆ 10-8 M (ಚಿತ್ರ 3c) ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಮಹತ್ವವನ್ನು ತಲುಪಿತು. DEET-ಪ್ರೇರಿತ NO ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, eNOS ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. DEET ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು eNOS ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸದಿದ್ದರೂ, eNOS ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಅದರ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸೈಟ್ (Thr-495) ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವಾಗ ಅದರ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸೈಟ್ (Ser-1177) ನಲ್ಲಿ eNOS ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 3d). ಇದಲ್ಲದೆ, ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸೈಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸೈಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ eNOS ನ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಕಿಣ್ವದ ಒಟ್ಟು ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ eNOS ನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ DEET ನ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ HUVEC ಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3d).
ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರೊಆಂಜಿಯೋಜೆನಿಕ್ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ VEGF ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. DEET ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ VEGF ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು, ಆದರೆ pFHHSiD ಈ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿತು.
DEET ನ ಪರಿಣಾಮಗಳು ಔಷಧೀಯ ದಿಗ್ಬಂಧನ ಮತ್ತು M3 ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಡೌನ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್ ಎರಡಕ್ಕೂ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, DEET ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಎಂಬ ಊಹೆಯನ್ನು ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆಶ್ಚರ್ಯಕರವಾಗಿ, HUVEC (ಡೇಟಾ ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ) ಮತ್ತು HEK/M3 (ಚಿತ್ರ 4a, b) ನಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವಲ್ಲಿ DEET ವಿಫಲವಾಗಿದೆ, ಬಳಸಿದ ಎರಡೂ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ.