ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಆರ್ಗನೊಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಮೇಲೆ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳು ಮತ್ತು ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳು.

ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಉತ್ತೇಜಕ ಪರಿಣಾಮಗಳುಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳು*ಹೈಪರಿಕಮ್ ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್* L. ನಲ್ಲಿ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಸೆಕೆಂಡರಿ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಕುರಿತು (2,4-D ಮತ್ತು ಕೈನೆಟಿನ್) ಮತ್ತು ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ (Fe₃O₄-NPs) ಅನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಚಿಕಿತ್ಸೆ [2,4-D (0.5 mg/L) + ಕೈನೆಟಿನ್ (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಿತು: ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸಸ್ಯದ ಎತ್ತರವು 59.6%, ಬೇರಿನ ಉದ್ದ 114.0%, ಮೊಗ್ಗು ಸಂಖ್ಯೆ 180.0% ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲಸ್ ತಾಜಾ ತೂಕವು 198.3% ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಈ ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು (50.85%) ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು ಮತ್ತು ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಅಂಶವನ್ನು 66.6% ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. GC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಹೈಪರೋಸೈಡ್, β-ಪ್ಯಾಥೋಲೀನ್ ಮತ್ತು ಸೆಟೈಲ್ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಂಶವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು, ಇದು ಒಟ್ಟು ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರದೇಶದ 93.36% ರಷ್ಟಿದೆ, ಆದರೆ ಒಟ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಫ್ಲೇವನಾಯ್ಡ್‌ಗಳ ವಿಷಯವು 80.1% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳು (PGR ಗಳು) ಮತ್ತು Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ (Fe₃O₄-NP ಗಳು) ಆರ್ಗನೊಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯಗಳ ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಸುಧಾರಣೆಗೆ ಭರವಸೆಯ ತಂತ್ರವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ.
ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ (ಹೈಪರಿಕಮ್ ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್ ಎಲ್.), ಇದನ್ನು ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ, ಇದು ಹೈಪರಿಕೇಸಿ ಕುಟುಂಬದ ದೀರ್ಘಕಾಲಿಕ ಮೂಲಿಕೆಯ ಸಸ್ಯವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಆರ್ಥಿಕ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.[1] ಇದರ ಸಂಭಾವ್ಯ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಘಟಕಗಳಲ್ಲಿ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಟ್ಯಾನಿನ್‌ಗಳು, ಕ್ಸಾಂಥೋನ್‌ಗಳು, ಫ್ಲೋರೊಗ್ಲುಸಿನಾಲ್, ನಾಫ್ಥಲೆನೆಡಿಯಂಥ್ರೋನ್ (ಹೈಪರಿನ್ ಮತ್ತು ಸ್ಯೂಡೋಹೈಪರಿನ್), ಫ್ಲೇವನಾಯ್ಡ್‌ಗಳು, ಫೀನಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಮತ್ತು ಸಾರಭೂತ ತೈಲಗಳು ಸೇರಿವೆ.[2,3,4] ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ ಅನ್ನು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಪ್ರಸಾರ ಮಾಡಬಹುದು; ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ವಿಧಾನಗಳ ಋತುಮಾನ, ಕಡಿಮೆ ಬೀಜ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ರೋಗಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಗುವಿಕೆಯು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಕೃಷಿ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಿರಂತರ ರಚನೆಗೆ ಅದರ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.[1,5,6]
ಹೀಗಾಗಿ, ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಅಂಗಾಂಶ ಕೃಷಿಯನ್ನು ತ್ವರಿತ ಸಸ್ಯ ಪ್ರಸರಣ, ಜರ್ಮ್‌ಪ್ಲಾಸಂ ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳ ಸಂರಕ್ಷಣೆ ಮತ್ತು ಔಷಧೀಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವಿಧಾನವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ [7, 8]. ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳು (PGR ಗಳು) ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲಸ್ ಮತ್ತು ಇಡೀ ಜೀವಿಗಳ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಕೃಷಿಗೆ ಅವಶ್ಯಕವಾಗಿವೆ. ಈ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಅವುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆಗಳ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ [9]. ಆದ್ದರಿಂದ, ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ (H. ಪರ್ಫೊರಟಮ್) [10] ನ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಪುನರುತ್ಪಾದಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ನಿಯಂತ್ರಕಗಳ ಸೂಕ್ತ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.
ಐರನ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು (Fe₃O₄) ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾದ ಅಥವಾ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತಿರುವ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಒಂದು ವರ್ಗವಾಗಿದೆ. Fe₃O₄ ಗಮನಾರ್ಹ ಕಾಂತೀಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು, ಉತ್ತಮ ಜೈವಿಕ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಮತ್ತು ಪರಿಸರದ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ಅಂಗಾಂಶ ಕೃಷಿ ವಿನ್ಯಾಸಗಳಲ್ಲಿ ಗಣನೀಯ ಗಮನವನ್ನು ಸೆಳೆದಿದೆ. ಈ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳು ಕೋಶ ವಿಭಜನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು, ಪೋಷಕಾಂಶಗಳ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಮತ್ತು ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರಬಹುದು [11].
ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಉತ್ತಮ ಉತ್ತೇಜಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆಯಾದರೂ, *H. ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್* ನಲ್ಲಿ Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳ ಸಂಯೋಜಿತ ಅನ್ವಯದ ಕುರಿತಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ವಿರಳವಾಗಿವೆ. ಈ ಜ್ಞಾನದ ಅಂತರವನ್ನು ತುಂಬಲು, ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಹೊಸ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಲು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಮೇಲೆ ಅವುಗಳ ಸಂಯೋಜಿತ ಪರಿಣಾಮಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಎರಡು ಉದ್ದೇಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: (1) ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆ, ಚಿಗುರು ಪುನರುತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಬೇರೂರಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸುವುದು; ಮತ್ತು (2) ಇನ್ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯತಾಂಕಗಳ ಮೇಲೆ Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು. ಭವಿಷ್ಯದ ಯೋಜನೆಗಳಲ್ಲಿ ಒಗ್ಗಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ (ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ) ಪುನರುತ್ಪಾದಿತ ಸಸ್ಯಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಸೇರಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು *H. ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್* ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪ್ರಸರಣ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಈ ಪ್ರಮುಖ ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯದ ಸುಸ್ಥಿರ ಬಳಕೆ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಹೊಲದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ವಾರ್ಷಿಕ ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ (ತಾಯಿ ಸಸ್ಯಗಳು) ಎಲೆಗಳ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಈ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಕೃಷಿ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು, ಎಲೆಗಳನ್ನು ಹಲವಾರು ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಸಸ್ಯದ ಮೇಲ್ಮೈಗಳನ್ನು 70% ಎಥೆನಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ 30 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಮುಳುಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೋಂಕುರಹಿತಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಟ್ವೀನ್ 20 ರ ಕೆಲವು ಹನಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 1.5% ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಪೋಕ್ಲೋರೈಟ್ (NaOCl) ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಮುಳುಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಮುಂದಿನ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸುವ ಮೊದಲು ಮೂರು ಬಾರಿ ಬರಡಾದ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಮುಂದಿನ ನಾಲ್ಕು ವಾರಗಳಲ್ಲಿ, ಚಿಗುರು ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ದರ, ಪ್ರತಿ ಚಿಗುರು ಸಂಖ್ಯೆ ಮತ್ತು ಚಿಗುರಿನ ಉದ್ದ ಸೇರಿದಂತೆ ಚಿಗುರು ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಪುನರುತ್ಪಾದಿತ ಚಿಗುರುಗಳು ಕನಿಷ್ಠ 2 ಸೆಂ.ಮೀ ಉದ್ದವನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ, ಅವುಗಳನ್ನು ಅರ್ಧ-ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಎಂಎಸ್ ಮಾಧ್ಯಮ, 0.5 ಮಿಗ್ರಾಂ/ಲೀ ಇಂಡೋಲ್ಬ್ಯುಟ್ರಿಕ್ ಆಮ್ಲ (ಐಬಿಎ) ಮತ್ತು 0.3% ಗೌರ್ ಗಮ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಬೇರೂರಿಸುವ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ಬೇರೂರಿಸುವ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮೂರು ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಮುಂದುವರೆಯಿತು, ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬೇರೂರಿಸುವ ದರ, ಬೇರಿನ ಸಂಖ್ಯೆ ಮತ್ತು ಬೇರಿನ ಉದ್ದವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕೃತಿಗೆ 10 ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಸರಿಸುಮಾರು 30 ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ನೀಡಿತು.
ಸಸ್ಯದ ಎತ್ತರವನ್ನು ರೂಲರ್ ಬಳಸಿ, ಸಸ್ಯದ ಬುಡದಿಂದ ಎತ್ತರದ ಎಲೆಯ ತುದಿಯವರೆಗೆ ಸೆಂಟಿಮೀಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (ಸೆಂ.ಮೀ.) ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಬೆಳೆಯುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿದ ತಕ್ಷಣ ಬೇರಿನ ಉದ್ದವನ್ನು ಮಿಲಿಮೀಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (ಮಿ.ಮೀ.) ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಸಸ್ಯದ ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಮೊಗ್ಗುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಯಿತು. ಗಂಟುಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಎಲೆಗಳ ಮೇಲಿನ ಕಪ್ಪು ಚುಕ್ಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ದೃಷ್ಟಿಗೋಚರವಾಗಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಈ ಕಪ್ಪು ಗಂಟುಗಳು ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಅಥವಾ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಗ್ರಂಥಿಗಳು ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಸಸ್ಯದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಶಾರೀರಿಕ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಬೆಳೆಯುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿದ ನಂತರ, ಮೊಳಕೆಗಳ ತಾಜಾ ತೂಕವನ್ನು ಮಿಲಿಗ್ರಾಂ (ಮಿಗ್ರಾಂ) ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನಿಕ್ ಮಾಪಕವನ್ನು ಬಳಸಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆಯ ದರವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುವ ವಿಧಾನ ಹೀಗಿದೆ: ವಿವಿಧ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳನ್ನು (ಕೈನೇಸ್‌ಗಳು, 2,4-D, ಮತ್ತು Fe3O4) ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ನಾಲ್ಕು ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದ ನಂತರ, ಕ್ಯಾಲಸ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವಿರುವ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಂಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆಯ ದರವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುವ ಸೂತ್ರವು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿರುತ್ತದೆ:
ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ 10 ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.
ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ದರವು ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆಯ ಹಂತದ ನಂತರ ಮೊಗ್ಗು ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸುವ ಕ್ಯಾಲಸ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಸೂಚಕವು ಕ್ಯಾಲಸ್ ಅಂಗಾಂಶವು ವಿಭಿನ್ನ ಅಂಗಾಂಶವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡು ಹೊಸ ಸಸ್ಯ ಅಂಗಗಳಾಗಿ ಬೆಳೆಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.
ಬೇರೂರಿಸುವ ಗುಣಾಂಕವು ಒಟ್ಟು ಶಾಖೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಗೆ ಬೇರೂರಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವಿರುವ ಶಾಖೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಅನುಪಾತವಾಗಿದೆ. ಈ ಸೂಚಕವು ಬೇರೂರಿಸುವ ಹಂತದ ಯಶಸ್ಸನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪ್ರಸರಣ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯ ಪ್ರಸರಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಉತ್ತಮ ಬೇರೂರಿಸುವಿಕೆಯು ಬೆಳೆಯುವ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಬದುಕಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು 90% ಮೆಥನಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. ಐವತ್ತು ಮಿಗ್ರಾಂ ಒಣಗಿದ ಸಸ್ಯ ಸಾಮಗ್ರಿಯನ್ನು 1 ಮಿಲಿ ಮೆಥನಾಲ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅಲ್ಟ್ರಾಸಾನಿಕ್ ಕ್ಲೀನರ್ (ಮಾದರಿ A5120-3YJ) ನಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 30 kHz ನಲ್ಲಿ ಸೋನಿಕೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಸೋನಿಕೇಟ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಮಾದರಿಯನ್ನು 6000 rpm ನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಸೂಪರ್‌ನೇಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕಾನ್ಸೆಕಾವೊ ಮತ್ತು ಇತರರು ವಿವರಿಸಿದ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ಪ್ಲಸ್-3000 S ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಬಳಸಿ ಹೈಪರಿಸಿನ್‌ನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು 592 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. [14].
ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳು (PGRs) ಮತ್ತು ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು (Fe₃O₄-NPs) ಹೊಂದಿರುವ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳು ಪುನರುತ್ಪಾದಿತ ಚಿಗುರು ಎಲೆಗಳ ಮೇಲೆ ಕಪ್ಪು ಗಂಟುಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲಿಲ್ಲ. 0.5 ಅಥವಾ 1 mg/L 2,4-D, 0.5 ಅಥವಾ 1 mg/L ಕೈನೆಟಿನ್, ಅಥವಾ 1, 2, ಅಥವಾ 4 mg/L ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಯಾವುದೇ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಂಟುಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ. ಕೆಲವು ಸಂಯೋಜನೆಗಳು ಕೈನೆಟಿನ್ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಗಂಟುಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು (ಆದರೆ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿಲ್ಲ), ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಕೈನೆಟಿನ್ (1–1.5 mg/L) ಮತ್ತು ಕಬ್ಬಿಣದ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು (2–4 mg/L) ನೊಂದಿಗೆ 2,4-D (0.5–2 mg/L) ಸಂಯೋಜನೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಕಪ್ಪು ಗಂಟುಗಳು ಹೈಪರಿಸಿನ್-ಭರಿತ ಗ್ರಂಥಿಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ, ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ಎರಡೂ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಕಪ್ಪು ಗಂಟುಗಳು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಕಂದು ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ, ಇದು ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಶೇಖರಣೆಗೆ ಅನುಕೂಲಕರ ವಾತಾವರಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. 2,4-D, ಕೈನೆಟಿನ್ ಮತ್ತು Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕ್ಯಾಲಸ್ ಬೆಳವಣಿಗೆ, ಕಡಿಮೆಯಾದ ಕಂದುಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿದ ಕ್ಲೋರೊಫಿಲ್ ಅಂಶವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಿತು, ಇದು ಸುಧಾರಿತ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಹಾನಿಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಕಡಿತವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ [37]. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು 2,4-D ಮತ್ತು Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಸೇಂಟ್ ಜಾನ್ಸ್ ವರ್ಟ್ ಕ್ಯಾಲಸ್‌ನ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಕೈನೆಟಿನ್‌ನ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3a–g). ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಆಂಟಿಫಂಗಲ್ ಮತ್ತು ಆಂಟಿಮೈಕ್ರೊಬಿಯಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ [38, 39] ಮತ್ತು ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದಾಗ, ಸಸ್ಯ ರಕ್ಷಣಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಒತ್ತಡ ಸೂಚ್ಯಂಕಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು [18]. ದ್ವಿತೀಯ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳ ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಳೀಯವಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗಿದ್ದರೂ, ಅವುಗಳ ನಿಜವಾದ ಇಳುವರಿ ಪರಿಸರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಮೇಲೆ ಹೆಚ್ಚು ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ. ಚಯಾಪಚಯ ಮತ್ತು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಸ್ಯ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ದ್ವಿತೀಯ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಪ್ರಭಾವಿಸಬಹುದು. ಇದಲ್ಲದೆ, ಪ್ರೇರಕಗಳು ಹೊಸ ಜೀನ್‌ಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು, ಇದು ಪ್ರತಿಯಾಗಿ ಕಿಣ್ವಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಬಹು ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ರಚನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನೆರಳು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಸೂರ್ಯನ ಬೆಳಕಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ *ಹೈಪರಿಕಮ್ ಪರ್ಫೊರಟಮ್* ನ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಆವಾಸಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ಹಗಲಿನ ತಾಪಮಾನ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಮತ್ತೊಂದು ಅಧ್ಯಯನವು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಸಹ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಈ ಡೇಟಾವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ, ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪ್ರೇರಕಗಳಾಗಿ ಕಬ್ಬಿಣದ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದೆ. ಈ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳು ಕಿಣ್ವಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಮೂಲಕ ಹೆಸ್ಪೆರಿಡಿನ್ ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಈ ಸಂಯುಕ್ತದ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2). ಆದ್ದರಿಂದ, ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಯುವ ಸಸ್ಯಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಮಧ್ಯಮ ಒತ್ತಡವನ್ನು ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿದಾಗ ವಿವೋದಲ್ಲಿ ಅಂತಹ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಎಂದು ವಾದಿಸಬಹುದು. ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯ ದರದ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ, ಈ ಪರಿಣಾಮವು ದುರ್ಬಲಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L ಕೈನೇಸ್ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ಮತ್ತು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯ ದರವನ್ನು 50.85% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು (ಚಿತ್ರ 4c). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ನ್ಯಾನೊಹಾರ್ಮೋನ್‌ಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಂಯೋಜನೆಗಳು ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯಗಳ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿದೆ. ಪಾಮರ್ ಮತ್ತು ಕೆಲ್ಲರ್ [50] 2,4-D ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ಸೇಂಟ್ ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದರು, ಆದರೆ ಕೈನೇಸ್ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. ಈ ಪರಿಣಾಮವು ಹಾರ್ಮೋನುಗಳ ಸಮತೋಲನದ ಸುಧಾರಣೆ ಮತ್ತು ಕೋಶ ವಿಭಜನೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯಿಂದಾಗಿ. ಬಾಲ್ ಮತ್ತು ಇತರರು [51] Fe₃O₄-NP ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಇದರಿಂದಾಗಿ ಸೇಂಟ್ ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡರು. 0.5 mg/L, 1 mg/L, ಮತ್ತು 1.5 mg/L ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವು ಅಗಸೆ ಸಸ್ಯಗಳ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯ ದರವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿತು [52]. ಕೈನೆಟಿನ್, 2,4-ಡೈಕ್ಲೋರೋಬೆನ್ಜೋಥಿಯಾಜೋಲಿನೋನ್ ಮತ್ತು Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಬಳಕೆಯು ಕ್ಯಾಲಸ್ ಮತ್ತು ಬೇರು ರಚನೆಯ ದರಗಳನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಿತು, ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಗಾಗಿ ಈ ಹಾರ್ಮೋನುಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಡ್ಡಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 2,4-ಡೈಕ್ಲೋರೋಬೆನ್ಜೋಥಿಯಾಜೋಲಿನೋನ್ ಅಥವಾ ಕೈನೆಟಿನ್‌ನ ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಬಳಕೆಯು ದೈಹಿಕ ಕ್ಲೋನಲ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸ, ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಒತ್ತಡ, ಅಸಹಜ ಕ್ಯಾಲಸ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಅಥವಾ ವಿಟ್ರಿಫಿಕೇಶನ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಆದ್ದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯ ದರವು ಆನುವಂಶಿಕ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಊಹಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಎಲ್ಲಾ ಪುನರುತ್ಪಾದಿತ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಆಣ್ವಿಕ ಗುರುತುಗಳನ್ನು (ಉದಾ. RAPD, ISSR, AFLP) ಅಥವಾ ಸೈಟೊಜೆನೆಟಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಣಯಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಏಕರೂಪತೆ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೋ ಸಸ್ಯಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು [53,54,55].
ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳನ್ನು (2,4-D ಮತ್ತು ಕೈನೆಟಿನ್) Fe₃O₄ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವುದರಿಂದ *ಹೈಪರಿಕಮ್ ಪರ್ಫೊರಾಟಮ್* ನಲ್ಲಿ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳ (ಹೈಪರಿಸಿನ್ ಮತ್ತು ಹೈಪರೋಸೈಡ್ ಸೇರಿದಂತೆ) ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು. ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಕ್ರಮ (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L ಕೈನೆಟಿನ್ + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) ಕ್ಯಾಲಸ್ ರಚನೆ, ಆರ್ಗನೊಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದಲ್ಲದೆ, ಸೌಮ್ಯವಾದ ಪ್ರಚೋದಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಸಹ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು, ಇದು ಸಸ್ಯದ ಒತ್ತಡ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಮತ್ತು ಔಷಧೀಯ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ನ್ಯಾನೊತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಔಷಧೀಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಸುಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕೈಗಾರಿಕಾ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು, ಡೋಸೇಜ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ ಮತ್ತು ಜೆನೆಟಿಕ್ ನಿಖರತೆಯ ಭವಿಷ್ಯದ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ದಾರಿ ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯಗಳ ಮೇಲಿನ ಮೂಲಭೂತ ಸಂಶೋಧನೆಯನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ.