ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕ DELLA ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್‌ಗೆ ಹಿಸ್ಟೋನ್ H2A ಬಂಧವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ.

ಡೆಲ್ಲಾ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆಬೆಳವಣಿಗೆ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳುಆಂತರಿಕ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ ಸಂಕೇತಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಸಸ್ಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಿಯಂತ್ರಕರಾಗಿ, DELLAಗಳು ಅವುಗಳ GRAS ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅಂಶಗಳು (TFಗಳು) ಮತ್ತು ಹಿಸ್ಟೋನ್ H2A ಗೆ ಬಂಧಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರವರ್ತಕಗಳ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಲು ನೇಮಕಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು DELLA ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಅನುವಾದದ ನಂತರ ಎರಡು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ: ಸಸ್ಯ ಹಾರ್ಮೋನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಪಾಲಿಯುಬಿಕ್ವಿಟಿನೇಷನ್ಗಿಬ್ಬೆರೆಲಿನ್, ಇದು ಅವುಗಳ ತ್ವರಿತ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಯುಬಿಕ್ವಿಟಿನ್ ತರಹದ ಮಾರ್ಪಡಕ (SUMO) ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಗಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದು ಅವುಗಳ ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, DELLA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಷನ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ: O-ಫ್ಯೂಕೋಸೈಲೇಷನ್ DELLA-TF ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ O-ಸಂಯೋಜಿತ N-ಅಸೆಟೈಲ್ಗ್ಲುಕೋಸಮೈನ್ (O-GlcNAc) ಮಾರ್ಪಾಡು DELLA-TF ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಸಂಘರ್ಷದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿರುವುದರಿಂದ DELLA ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಪಾತ್ರವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ, ಕೆಲವರು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ DELLA ಅವನತಿಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತಾರೆ ಮತ್ತು ಇತರರು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅವುಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತಾರೆ. ಇಲ್ಲಿ, ನಾವು GA1-3 ರೆಪ್ರೆಸರ್ (RGA), AtDELLA ನಲ್ಲಿರುವ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಯಿಂದ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾದಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು PolyS ಮತ್ತು PolyS/T ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿನ ಎರಡು RGA ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ H2A ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಗುರಿ ಪ್ರವರ್ತಕಗಳೊಂದಿಗೆ RGA ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಮೂಲಕ RGA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ RGA-TF ಸಂವಹನಗಳು ಅಥವಾ RGA ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ. ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನವು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ DELLA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ.
ನಮ್ಮ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು GA-ಕೊರತೆಯಿರುವ Ga1 ಹಿನ್ನೆಲೆಯಲ್ಲಿ Pep1 ಮತ್ತು Pep2 ಎರಡೂ RGA ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ ಆಗಿವೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಜೊತೆಗೆ, ಫಾಸ್ಫೋಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು RGA ನಲ್ಲಿ Pep1 ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿವೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಅದರ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಇನ್ನೂ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ53,54,55. ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಈ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅನ್ನು RGAGKG ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೀನ್ ಬಳಸಿ ಮಾತ್ರ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದಾಗಿರುವುದರಿಂದ Pep2 ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಈ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ. Pep1 ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸಿದ m1A ರೂಪಾಂತರವು ಪ್ಲಾಂಟಾದಲ್ಲಿ RGA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸ್ವಲ್ಪ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದ್ದರೂ, RGA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವಲ್ಲಿ m2A ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿದಾಗ ಅದು ಸಂಯೋಜಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6). ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, ga1 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ GA-ವರ್ಧಿತ ಸ್ಲೈ1 ರೂಪಾಂತರದಲ್ಲಿ Pep1 ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ, GA RGA ಡಿಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. GA RGA ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತನಿಖೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಗುರುತಿಸಲಾಗದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್‌ನ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು ಎಂಬುದು ಒಂದು ಸಾಧ್ಯತೆಯಾಗಿದೆ. CK1 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ EL1 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅಕ್ಕಿಯಲ್ಲಿ GA ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ41, ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ EL1 ಹೋಮೋಲೋಗ್ (AEL1-4) ನ ಉನ್ನತ-ಕ್ರಮಾಂಕದ ರೂಪಾಂತರಗಳು RGA ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಪ್ಪಂದದಲ್ಲಿ, ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ AEL ಓವರ್‌ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸಿಂಗ್ ಲೈನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ael ಟ್ರಿಪಲ್ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇತ್ತೀಚಿನ ಫಾಸ್ಫೋಪ್ರೋಟೀಮಿಕ್ ಅಧ್ಯಯನವು ಈ ಕೈನೇಸ್‌ಗಳ ತಲಾಧಾರಗಳಾಗಿ ಯಾವುದೇ DELLA ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಿಲ್ಲ56. ನಾವು ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದಾಗ, ಗೋಧಿಯಲ್ಲಿ GSK3/SHAGGY-ತರಹದ ಕೈನೇಸ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್ (Triticum aestivum), DELLA (Rht-B1b)57 ಅನ್ನು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟ್ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ GSK3 ನಿಂದ Rht-B1b ನ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಪ್ಲಾಂಟಾದಲ್ಲಿ ದೃಢೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿಲ್ಲ. GSK3 ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ನಂತರ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು Rht-B1b ನ DELLA ಮತ್ತು GRAS ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಇರುವ ಮೂರು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 3). ಮೂರು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ತಾಣಗಳಲ್ಲಿ ಸೆರಿನ್ ನಿಂದ ಅಲನೈನ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್ ಗೋಧಿಯಲ್ಲಿ Rht-B1b ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಇದು Pep2 RGA ನಲ್ಲಿನ ಅಲನೈನ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳು RGA ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದೆ ಎಂಬ ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವನತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ Rht-B1b57 ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಮತ್ತಷ್ಟು ತೋರಿಸಿವೆ. Pep2 RGA ನಲ್ಲಿನ ಅಲನೈನ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳು ಪ್ಲಾಂಟಾದಲ್ಲಿ ಅದರ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸುವ ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಇದು ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿದೆ. ಗೋಧಿಯಲ್ಲಿನ GSK3 ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ 57 ರಲ್ಲಿ ಬ್ರಾಸಿನೋಸ್ಟೆರಾಯ್ಡ್-ಇನ್‌ಸೆನ್ಸಿಟಿವ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ 2 (BIN2) ನ ಆರ್ಥೋಲಾಗ್ ಆಗಿದೆ. BIN2 BR ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು BR BIN2 ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಮೂಲಕ ಅದರ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ 58. BR ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ RGA ಸ್ಥಿರತೆ 59 ಅಥವಾ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಾವು ತೋರಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 2), ಇದು RGA ಅನ್ನು BIN2 ನಿಂದ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಮಾಡುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಎಲ್ಲಾ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ದತ್ತಾಂಶಗಳನ್ನು ಎಕ್ಸೆಲ್ ಬಳಸಿ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಮೊದಲೇ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಯಾವುದೇ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿಲ್ಲ. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಯಾವುದೇ ದತ್ತಾಂಶವನ್ನು ಹೊರಗಿಡಲಾಗಿಲ್ಲ; ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕಗೊಳಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ; ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹಂಚಿಕೆಯ ಬಗ್ಗೆ ಸಂಶೋಧಕರು ತಿಳಿದಿದ್ದರು. ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಫಿಗರ್ ಲೆಜೆಂಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಕಚ್ಚಾ ದತ್ತಾಂಶ ಫೈಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒದಗಿಸಲಾಗಿದೆ.