ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸಿದ್ಧತೆಗಳ ಸಣ್ಣ ಜಲವಾಸಿ ಗೊದಮೊಟ್ಟೆ ಮರಿಗಳ ಮರಣ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವ.

ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ವಾಣಿಜ್ಯಿಕ ವಸ್ತುಗಳ ಮಾರಕತೆ, ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದೆ.ಸೈಪರ್ಮೆಥ್ರಿನ್ಅನುರಾನ್ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು. ತೀವ್ರ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ, 96 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 100–800 μg/L ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ, ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು (1, 3, 6, ಮತ್ತು 20 μg/L) ಮರಣಕ್ಕಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮತ್ತು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕೆಂಪು ರಕ್ತ ಕಣ ಪರಮಾಣು ಅಸಹಜತೆಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಿಗೆ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣದ LC50 273.41 μg L−1 ಆಗಿತ್ತು. ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ, ಅತ್ಯಧಿಕ ಸಾಂದ್ರತೆಯು (20 μg L−1) 50% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾದ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅರ್ಧದಷ್ಟು ಜನರನ್ನು ಕೊಂದಿತು. ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯು 6 ಮತ್ತು 20 μg L−1 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿತು ಮತ್ತು ಹಲವಾರು ಪರಮಾಣು ಅಸಹಜತೆಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಯಿತು, ಇದು ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣವು P. ಗ್ರಾಸಿಲಿಸ್ ವಿರುದ್ಧ ಜಿನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಈ ಜಾತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಪಾಯವನ್ನುಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಲ್ಪಾವಧಿ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯಲ್ಲಿ ಈ ಪರಿಸರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಚಲನಶೀಲತೆಯ ಮೇಲೆ ಬಹು ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಪಿ. ಗ್ರಾಸಿಲಿಸ್ ಮೇಲೆ ವಿಷಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೀರ್ಮಾನಿಸಬಹುದು.
ಕೃಷಿ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳ ನಿರಂತರ ವಿಸ್ತರಣೆ ಮತ್ತು ತೀವ್ರ ಅನ್ವಯಿಕೆಯಿಂದಾಗಿಕೀಟ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ರಮಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಜಲಚರ ಪ್ರಾಣಿಗಳು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ 1,2. ಕೃಷಿ ಹೊಲಗಳ ಬಳಿ ಇರುವ ಜಲ ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಉಭಯಚರಗಳಂತಹ ಗುರಿಯಿಲ್ಲದ ಜೀವಿಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಮತ್ತು ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
ಪರಿಸರ ಮಾತೃಕೆಗಳ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನದಲ್ಲಿ ಉಭಯಚರಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ಪಡೆಯುತ್ತಿವೆ. ಸಂಕೀರ್ಣ ಜೀವನ ಚಕ್ರಗಳು, ತ್ವರಿತ ಲಾರ್ವಾ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದರಗಳು, ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಸ್ಥಿತಿ, ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಚರ್ಮ 10,11, ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಗಾಗಿ ನೀರಿನ ಮೇಲಿನ ಅವಲಂಬನೆ 12 ಮತ್ತು ಅಸುರಕ್ಷಿತ ಮೊಟ್ಟೆಗಳು 11,13,14 ನಂತಹ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದಾಗಿ ಅನುರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಪರಿಸರ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳ ಉತ್ತಮ ಜೈವಿಕ ಸೂಚಕಗಳೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಳುವ ಕಪ್ಪೆ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಪುಟ್ಟ ನೀರಿನ ಕಪ್ಪೆ (ಫಿಸಲೇಮಸ್ ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್) ಕೀಟನಾಶಕ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಜೈವಿಕ ಸೂಚಕ ಪ್ರಭೇದವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ 4,5,6,7,15. ಈ ಪ್ರಭೇದವು ನಿಂತ ನೀರು, ಸಂರಕ್ಷಿತ ಪ್ರದೇಶಗಳು ಅಥವಾ ಅರ್ಜೆಂಟೀನಾ, ಉರುಗ್ವೆ, ಪರಾಗ್ವೆ ಮತ್ತು ಬ್ರೆಜಿಲ್‌ನಲ್ಲಿ ವೇರಿಯಬಲ್ ಆವಾಸಸ್ಥಾನ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ 1617 ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಆವಾಸಸ್ಥಾನಗಳ ವ್ಯಾಪಕ ವಿತರಣೆ ಮತ್ತು ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯಿಂದಾಗಿ IUCN ವರ್ಗೀಕರಣದಿಂದ ಸ್ಥಿರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ 18.
ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿ ಸಬ್‌ಮಾರಣಾಂತಿಕ ಪರಿಣಾಮಗಳು ವರದಿಯಾಗಿವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ವರ್ತನೆಯ, ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳು 23,24,25, ಬದಲಾದ ಮರಣ ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರದ ಸಮಯ, ಕಿಣ್ವಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳು, ಮೊಟ್ಟೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಯಶಸ್ಸು ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು 24,25, ಹೈಪರ್‌ಆಕ್ಟಿವಿಟಿ 26, ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ 27 ಮತ್ತು ಈಜು ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು 7,28 ಸೇರಿವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಸೀಮಿತವಾಗಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅನುರಾನ್ ಪ್ರಭೇದಗಳು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ಗೆ ಒಳಗಾಗುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.
ಪರಿಸರ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಉಭಯಚರಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅತ್ಯಂತ ಗಂಭೀರವಾದ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಣಾಮವೆಂದರೆ ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಉಂಟಾಗುವ ಆನುವಂಶಿಕ ಹಾನಿ 13. ರಕ್ತ ಕಣ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು ಕಾಡು ಪ್ರಭೇದಗಳಿಗೆ ವಸ್ತುವಿನ ಸಂಭಾವ್ಯ ವಿಷತ್ವದ ಪ್ರಮುಖ ಜೈವಿಕ ಸೂಚಕವಾಗಿದೆ 29. ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಪರಿಸರದಲ್ಲಿನ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ 30. ಇದು ತ್ವರಿತ, ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಅಗ್ಗದ ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದು, ಉಭಯಚರಗಳಂತಹ ಜೀವಿಗಳ ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಉತ್ತಮ ಸೂಚಕವಾಗಿದೆ 31,32 ಮತ್ತು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವ ಬಗ್ಗೆ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ 33.
ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಅಪಾಯದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಣ್ಣ ಜಲವಾಸಿ ಗೊದಮೊಟ್ಟೆಗಳಿಗೆ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳ ವಿಷಕಾರಿ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಉದ್ದೇಶವಾಗಿತ್ತು.
ಪರೀಕ್ಷೆಯ ತೀವ್ರ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳ ಸಂಚಿತ ಮರಣ (%).
ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳ ಸಂಚಿತ ಮರಣ (%).
ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ (6 ಮತ್ತು 20 μg/L) ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣ ಪ್ರಮಾಣ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದು ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು (MN) ಮತ್ತು ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಪರಮಾಣು ಅಸಹಜತೆಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ಸಾಕ್ಷಿಯಾಗಿದೆ. MN ರಚನೆಯು ಮೈಟೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ದೋಷಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಕಳಪೆ ಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಾಗಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಲ್ಲಿನ ದೋಷಗಳು, ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯಲ್ಲಿನ ದೋಷಗಳು ಮತ್ತು DNA ಹಾನಿ ದುರಸ್ತಿಯಲ್ಲಿನ ದೋಷಗಳು 38,39 ಮತ್ತು ಕೀಟನಾಶಕ-ಪ್ರೇರಿತ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಒತ್ತಡಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿರಬಹುದು 40,41. ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿದ ಎಲ್ಲಾ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಇತರ ಅಸಹಜತೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದರಿಂದ ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪರಮಾಣು ಅಸಹಜತೆಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 5% ಮತ್ತು 20% ರಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ (1 μg/L) ಮತ್ತು ಅತ್ಯಧಿಕ (20 μg/L) ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾದವು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಒಂದು ಜಾತಿಯ DNA ಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಗೆ ಗಂಭೀರ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಕುಸಿತ, ಬದಲಾದ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಫಿಟ್‌ನೆಸ್, ಅಂತರ್‌ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ, ಆನುವಂಶಿಕ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯ ನಷ್ಟ ಮತ್ತು ಬದಲಾದ ವಲಸೆ ದರಗಳು ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ಈ ಎಲ್ಲಾ ಅಂಶಗಳು ಜಾತಿಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ವಹಣೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು42,43. ಎರಿಥ್ರಾಯ್ಡ್ ಅಸಹಜತೆಗಳ ರಚನೆಯು ಸೈಟೊಕಿನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಬ್ಲಾಕ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸಬಹುದು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅಸಹಜ ಕೋಶ ವಿಭಜನೆ (ಬೈನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್‌ಗಳು)44,45 ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ; ಮಲ್ಟಿಲೋಬ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು ಬಹು ಹಾಲೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪರಮಾಣು ಪೊರೆಯ ಮುಂಚಾಚಿರುವಿಕೆಗಳಾಗಿವೆ46, ಆದರೆ ಇತರ ಎರಿಥ್ರಾಯ್ಡ್ ಅಸಹಜತೆಗಳು ಪರಮಾಣು ಮೂತ್ರಪಿಂಡಗಳು/ಬ್ಲೆಬ್‌ಗಳಂತಹ DNA ವರ್ಧನೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿರಬಹುದು47. ಪರಮಾಣು ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ಆಮ್ಲಜನಕ ಸಾಗಣೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಕಲುಷಿತ ನೀರಿನಲ್ಲಿ48,49. ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ50.
ಇತರ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಸಹ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿವೆ. ಕಬಾನಾ ಮತ್ತು ಇತರರು.51, 96 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ (5000 ಮತ್ತು 10,000 μg L−1) ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ ಓಡಾಂಟೊಫ್ರೈನಸ್ ಅಮೆರಿಕಾನಸ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಬೈನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಂತಹ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಮತ್ತು ಪರಮಾಣು ಬದಲಾವಣೆಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದರು. P. ಬಿಲಿಗೊನಿಗೆರಸ್52 ಮತ್ತು ರೈನೆಲ್ಲಾ ಅರೆನರಮ್53 ನಲ್ಲಿ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಹಲವಾರು ಜಲಚರ ಜೀವಿಗಳ ಮೇಲೆ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು MN ಮತ್ತು ENA ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಉಭಯಚರಗಳ ಮೇಲೆ ಸಬ್‌ಮಾರಕ ಪರಿಣಾಮಗಳ ಸೂಚಕವಾಗಿರಬಹುದು ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಯ ಪ್ರಭೇದಗಳು ಮತ್ತು ವಿಷಕಾರಿಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ಕಾಡು ಜನಸಂಖ್ಯೆಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪರಿಸರ ಅಪಾಯವನ್ನುಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ (ತೀವ್ರ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಎರಡೂ), HQಗಳು US ಪರಿಸರ ಸಂರಕ್ಷಣಾ ಸಂಸ್ಥೆ (EPA) ಮಟ್ಟಕ್ಕಿಂತ54 ಮೀರಿದ್ದು, ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಇದ್ದರೆ ಜಾತಿಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು. ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಅಪಾಯದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನದಲ್ಲಿ, ಮರಣದ NOEC 3 μg L−1 ಆಗಿದ್ದು, ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಜಾತಿಗಳಿಗೆ ಅಪಾಯವನ್ನುಂಟುಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸುತ್ತದೆ55. ಎಂಡೋಸಲ್ಫಾನ್ ಮತ್ತು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಮಿಶ್ರಣಕ್ಕೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ R. ಅರೆನರಮ್ ಲಾರ್ವಾಗಳಿಗೆ ಮಾರಕ NOEC 168 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ 500 μg L−1 ಆಗಿತ್ತು; ಈ ಮೌಲ್ಯವು 336 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ 0.0005 μg L−1 ಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು. ಲೇಖಕರು ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯು ದೀರ್ಘವಾದಷ್ಟೂ, ಜಾತಿಗಳಿಗೆ ಹಾನಿಕಾರಕ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತಾರೆ. ಅದೇ ಮಾನ್ಯತೆ ಸಮಯದಲ್ಲಿ NOEC ಮೌಲ್ಯಗಳು P. ಗ್ರಾಸಿಲಿಸ್ ಮೌಲ್ಯಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡುವುದು ಸಹ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ಗೆ ಜಾತಿಗಳ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಜಾತಿ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಮರಣದ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ, ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್‌ನ CHQ ಮೌಲ್ಯವು 64.67 ತಲುಪಿತು, ಇದು ಯುಎಸ್ ಪರಿಸರ ಸಂರಕ್ಷಣಾ ಸಂಸ್ಥೆ ನಿಗದಿಪಡಿಸಿದ ಉಲ್ಲೇಖ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ54, ಮತ್ತು ಆರ್. ಅರೆನರಮ್ ಲಾರ್ವಾಗಳ CHQ ಮೌಲ್ಯವು ಈ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (CHQ > 336 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ 388.00), ಇದು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾದ ಕೀಟನಾಶಕಗಳು ಹಲವಾರು ಉಭಯಚರ ಪ್ರಭೇದಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಪಾಯವನ್ನುಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಸುಮಾರು 30 ದಿನಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ56, ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಸೋಂಕಿತ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳು ಚಿಕ್ಕ ವಯಸ್ಸಿನಲ್ಲಿಯೇ ವಯಸ್ಕ ಅಥವಾ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಹಂತವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುವುದನ್ನು ತಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಕುಸಿತಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ತೀರ್ಮಾನಿಸಬಹುದು.
ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಅಸಹಜತೆಗಳ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಅಪಾಯದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನದಲ್ಲಿ, CHQ ಮೌಲ್ಯಗಳು 14.92 ರಿಂದ 97.00 ರವರೆಗೆ ಇದ್ದು, ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ತನ್ನ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಆವಾಸಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ P. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್‌ಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಅಪಾಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಮರಣವನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು, P. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್‌ಗೆ ಸಹಿಸಬಹುದಾದ ಕ್ಸೆನೋಬಯೋಟಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಗರಿಷ್ಠ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 4.24 μg L−1 ಆಗಿತ್ತು. ಆದಾಗ್ಯೂ, 1 μg/L ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು. ಈ ಅಂಶವು ಅಸಹಜ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು57 ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಆವಾಸಸ್ಥಾನಗಳಲ್ಲಿ ಜಾತಿಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಮತ್ತು ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಇದು ಉಭಯಚರ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
ಕೀಟನಾಶಕ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್‌ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತೀವ್ರ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲದ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು. ವಿಷಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮಗಳಿಂದಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣ ಪ್ರಮಾಣಗಳು ಕಂಡುಬಂದವು, ಇದು ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಎರಿಥ್ರೋಸೈಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಅಸಹಜತೆಗಳು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸೆರೇಟೆಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು, ಲೋಬ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ವೆಸಿಕ್ಯುಲರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ಸಾಕ್ಷಿಯಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಪ್ರಭೇದಗಳು ತೀವ್ರ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಎರಡೂ ಹೆಚ್ಚಿದ ಪರಿಸರ ಅಪಾಯಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನಾ ಗುಂಪಿನ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಈ ದತ್ತಾಂಶವು, ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಸಹ ಅಸಿಟೈಲ್‌ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್ (AChE) ಮತ್ತು ಬ್ಯುಟೈರಿಲ್‌ಕೋಲಿನೆಸ್ಟರೇಸ್ (BChE) ಚಟುವಟಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಈಜು ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೌಖಿಕ ವಿರೂಪಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಇದು ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಈ ಜಾತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾರಕ ಮತ್ತು ಸಬ್‌ಮಾಟಲ್ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಹಾರ್ಟ್‌ಮನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. 60 ರ ಸಂಶೋಧನೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಇತರ ಒಂಬತ್ತು ಕೀಟನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್‌ನ ವಾಣಿಜ್ಯ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳು ಪಿ. ಗ್ರ್ಯಾಸಿಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಅದೇ ಕುಲದ ಮತ್ತೊಂದು ಜಾತಿಗೆ (ಪಿ. ಕುವಿಯೇರಿ) ಹೆಚ್ಚು ವಿಷಕಾರಿಯಾಗಿದೆ. ಪರಿಸರ ಸಂರಕ್ಷಣೆಗಾಗಿ ಕಾನೂನುಬದ್ಧವಾಗಿ ಅನುಮೋದಿಸಲಾದ ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಕುಸಿತಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ಪಿ. ಗ್ರಾಸಿಲಿಸ್‌ಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಪಾಯವನ್ನುಂಟುಮಾಡಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಉಭಯಚರ ಜೀವಿಗಳಿಗೆ ಕೀಟನಾಶಕದ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಉಭಯಚರ ಪ್ರಭೇದಗಳ ಕುರಿತು ಸಂಶೋಧನೆಯನ್ನು ಪ್ರೋತ್ಸಾಹಿಸಬೇಕು, ಏಕೆಂದರೆ ಈ ಜೀವಿಗಳ ಬಗ್ಗೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಬ್ರೆಜಿಲಿಯನ್ ಪ್ರಭೇದಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಮಾಹಿತಿ ವಿರಳವಾಗಿದೆ.
ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲದ ವಿಷತ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆಯು 168 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ (7 ದಿನಗಳು) ನಡೆಯಿತು ಮತ್ತು ಸಬ್‌ಮಾರಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು: 1, 3, 6 ಮತ್ತು 20 μg ai L−1. ಎರಡೂ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿಗೆ 10 ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳನ್ನು ಆರು ಪ್ರತಿಕೃತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಒಟ್ಟು 60 ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಿಗೆ. ಏತನ್ಮಧ್ಯೆ, ನೀರು-ಮಾತ್ರ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿತು. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸೆಟಪ್ 500 ಮಿಲಿ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು 50 ಮಿಲಿ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ 1 ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಬರಡಾದ ಗಾಜಿನ ತಟ್ಟೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿತ್ತು. ಆವಿಯಾಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಅನ್ನು ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಫಿಲ್ಮ್‌ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಗಿತ್ತು ಮತ್ತು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಗಾಳಿ ತುಂಬಿಸಲಾಯಿತು.
0, 96, ಮತ್ತು 168 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೀಟನಾಶಕ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ನೀರನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ಸಬಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು 68 ಮತ್ತು ಮಾರ್ಟಿನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು 69 ರ ಪ್ರಕಾರ, ಟ್ರಿಪಲ್ ಕ್ವಾಡ್ರುಪೋಲ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಯೊಂದಿಗೆ (ವೇರಿಯನ್ ಮಾದರಿ 1200, ಪಾಲೊ ಆಲ್ಟೊ, ಕ್ಯಾಲಿಫೋರ್ನಿಯಾ, ಯುಎಸ್ಎ) ಗ್ಯಾಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಾಂಟಾ ಮಾರಿಯಾ ಫೆಡರಲ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ಕೀಟನಾಶಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ (LARP) ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕೀಟನಾಶಕಗಳ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ನಿರ್ಣಯವನ್ನು ಪೂರಕ ವಸ್ತುವಾಗಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಟೇಬಲ್ SM1).
ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆ (MNT) ಮತ್ತು ಕೆಂಪು ಕೋಶ ಪರಮಾಣು ಅಸಹಜತೆ ಪರೀಕ್ಷೆ (RNA) ಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನಿಂದ 15 ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳನ್ನು 5% ಲಿಡೋಕೇಯ್ನ್ (50 mg g-170) ನೊಂದಿಗೆ ಅರಿವಳಿಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಹೆಪಾರಿನೈಸ್ಡ್ ಸಿರಿಂಜ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಪಂಕ್ಚರ್ ಮೂಲಕ ರಕ್ತದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ರಕ್ತದ ಸ್ಮೀಯರ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ, ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ, 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 100% ಮೆಥನಾಲ್ (4 °C) ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿ, ನಂತರ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ 10% ಗೀಮ್ಸಾ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಲಾಯಿತು. ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಕಲೆಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆದು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು.
ಪ್ರತಿ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ನಿಂದ ಕನಿಷ್ಠ 1000 ಆರ್‌ಬಿಸಿಗಳನ್ನು 100× ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು MN ಮತ್ತು ENA ಇರುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ 71 ಉದ್ದೇಶದೊಂದಿಗೆ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ಸೈಪರ್‌ಮೆಥ್ರಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ ಟ್ಯಾಡ್‌ಪೋಲ್‌ಗಳಿಂದ ಒಟ್ಟು 75,796 ಆರ್‌ಬಿಸಿಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಕ್ಯಾರಸ್ಕೊ ಮತ್ತು ಇತರರು ಮತ್ತು ಫೆನೆಚ್ ಮತ್ತು ಇತರರು 38,72 ರ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು, ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಮಾಣು ಗಾಯಗಳ ಆವರ್ತನವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಮೂಲಕ: (1) ಅನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟ್ ಕೋಶಗಳು: ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಲ್ಲದ ಕೋಶಗಳು; (2) ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳು: ಪರಮಾಣು ವಿಘಟನೆ, ಪ್ರೋಗ್ರಾಮ್ ಮಾಡಲಾದ ಜೀವಕೋಶ ಸಾವು; (3) ಬೈನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟ್ ಕೋಶಗಳು: ಎರಡು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು; (4) ಪರಮಾಣು ಮೊಗ್ಗುಗಳು ಅಥವಾ ಬ್ಲೆಬ್ ಕೋಶಗಳು: ಪರಮಾಣು ಪೊರೆಯ ಸಣ್ಣ ಮುಂಚಾಚಿರುವಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು, ಮೈಕ್ರೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲುವ ಬ್ಲೆಬ್‌ಗಳು; (5) ಕ್ಯಾರಿಯೋಲೈಸ್ಡ್ ಕೋಶಗಳು: ಆಂತರಿಕ ವಸ್ತುವಿಲ್ಲದೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನ ಬಾಹ್ಯರೇಖೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು; (6) ನೋಚ್ಡ್ ಕೋಶಗಳು: ಅವುಗಳ ಆಕಾರದಲ್ಲಿ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಬಿರುಕುಗಳು ಅಥವಾ ನೋಚ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು, ಇದನ್ನು ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಆಕಾರದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳು ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ; (7) ಲೋಬ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು: ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಿದ ಕೋಶಕಗಳಿಗಿಂತ ದೊಡ್ಡದಾದ ಪರಮಾಣು ಮುಂಚಾಚಿರುವಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು; ಮತ್ತು (8) ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಕೋಶಗಳು: ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆಯಾದ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂ ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳು. ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ.
ತೀವ್ರ ವಿಷತ್ವ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು (LC50) GBasic ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಮತ್ತು TSK-ಟ್ರಿಮ್ಡ್ ಸ್ಪಿಯರ್‌ಮ್ಯಾನ್-ಕಾರ್ಬರ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ74. ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಪರೀಕ್ಷಾ ದತ್ತಾಂಶವನ್ನು ದೋಷ ಸಾಮಾನ್ಯತೆ (ಶಾಪಿರೊ-ವಿಲ್ಕ್ಸ್) ಮತ್ತು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕರೂಪತೆ (ಬಾರ್ಟ್ಲೆಟ್) ಗಾಗಿ ಮೊದಲೇ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ANOVA) ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಟುಕಿಯ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ತಮ್ಮೊಳಗೆ ಡೇಟಾವನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ಡೇಟಾವನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ಡನೆಟ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು.
ಡನ್ನೆಟ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು LOEC ಮತ್ತು NOEC ಡೇಟಾವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. 95% (p < 0.05) ರ ಮಹತ್ವ ಮಟ್ಟದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಟ್ಯಾಟಿಸ್ಟಿಕಾ 8.0 ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಸ್ಟ್ಯಾಟ್‌ಸಾಫ್ಟ್) ಬಳಸಿ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.