ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್ ಕಾಯಿಲೆಗೆ ಅಯೋಡಿನ್ ಮತ್ತು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಪ್ರಚೋದಕಗಳ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ.

ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್ ಎಂಬುದು ಪೈನ್ ಅರಣ್ಯ ಪರಿಸರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ತೀವ್ರ ಆರ್ಥಿಕ ನಷ್ಟವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಕ್ವಾರಂಟೈನ್ ವಲಸೆ ಎಂಡೋಪರಾಸೈಟ್ ಆಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನವು ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳ ನೆಮಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸುತ್ತದೆ. ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ವಿರುದ್ಧ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ (ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ) ನ ನೆಮಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳು ಹೋಲುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ (10 μg/mL) ಅಧಿಕವಾಗಿದ್ದವು. 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಫಲವತ್ತತೆ, ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಚಟುವಟಿಕೆ, ಭ್ರೂಣ ಮತ್ತು ಲಾರ್ವಾ ಮರಣ ಮತ್ತು ಚಲನಶೀಲ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು. ಅಕಶೇರುಕ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಗ್ಲುಟಮೇಟ್-ಗೇಟೆಡ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಚಾನಲ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳ ಆಣ್ವಿಕ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ನಂತಹ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಗ್ರಾಹಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸೈಟ್‌ಗೆ ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ. 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಅಸಹಜ ಅಂಗ ಕುಸಿತ/ಕುಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿದ ನಿರ್ವಾತೀಕರಣ ಸೇರಿದಂತೆ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಫಿನೋಟೈಪಿಕ್ ವಿರೂಪಗಳನ್ನು ಸಹ ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ನೆಮಟೋಡ್ ಮೆತಿಲೀಕರಣ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಮರಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಾತಗಳು ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, 5-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಎರಡೂ ಸಸ್ಯ ಪ್ರಭೇದಗಳಿಗೆ (ಎಲೆಕೋಸು ಮತ್ತು ಮೂಲಂಗಿ) ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲ. ಹೀಗಾಗಿ, ಪರಿಸರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಅನ್ವಯವು ಪೈನ್ ವಿಲ್ಟ್ ಗಾಯವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಪೈನ್ ಮರದ ನೆಮಟೋಡ್ (ಬರ್ಸಾಫೆಲೆಂಚಸ್ ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್) ಪೈನ್ ಮರದ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ (PWN) ಸೇರಿದ್ದು, ಇದು ಪೈನ್ ಅರಣ್ಯ ಪರಿಸರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ತೀವ್ರ ಪರಿಸರ ಹಾನಿಯನ್ನುಂಟುಮಾಡುವ ವಲಸೆ ಎಂಡೋಪರಾಸಿಟಿಕ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಸೇರಿದೆ. ಪೈನ್ ಮರದ ನೆಮಟೋಡ್‌ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಪೈನ್ ವಿಲ್ಟ್ ರೋಗ (PWD) ಏಷ್ಯಾ ಮತ್ತು ಯುರೋಪ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಖಂಡಗಳಲ್ಲಿ ಗಂಭೀರ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗುತ್ತಿದೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತರ ಅಮೆರಿಕಾದಲ್ಲಿ, ನೆಮಟೋಡ್ ಪರಿಚಯಿಸಲಾದ ಪೈನ್ ಜಾತಿಗಳನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ1,2. ಪೈನ್ ಮರದ ಅವನತಿ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಆರ್ಥಿಕ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಜಾಗತಿಕ ಹರಡುವಿಕೆಯ ನಿರೀಕ್ಷೆಯು ಚಿಂತಾಜನಕವಾಗಿದೆ3. ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪೈನ್ ಪ್ರಭೇದಗಳು ನೆಮಟೋಡ್‌ನಿಂದ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ದಾಳಿಗೊಳಗಾಗುತ್ತವೆ: ಪೈನಸ್ ಡೆನ್ಸಿಫ್ಲೋರಾ, ಪೈನಸ್ ಸಿಲ್ವೆಸ್ಟ್ರಿಸ್, ಪೈನಸ್ ಥನ್‌ಬರ್ಗಿ, ಪೈನಸ್ ಕೊರೈಯೆನ್ಸಿಸ್, ಪೈನಸ್ ಥನ್‌ಬರ್ಗಿ, ಪೈನಸ್ ಥನ್‌ಬರ್ಗಿ ಮತ್ತು ಪೈನಸ್ ರೇಡಿಯಾಟಾ4. ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್ ಒಂದು ಗಂಭೀರ ಕಾಯಿಲೆಯಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಸೋಂಕಿನ ವಾರಗಳು ಅಥವಾ ತಿಂಗಳುಗಳಲ್ಲಿ ಪೈನ್ ಮರಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್ ಏಕಾಏಕಿ ವಿವಿಧ ಪರಿಸರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಿರಂತರ ಸೋಂಕಿನ ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ1.
ಬರ್ಸಾಫೆಲೆಂಚಸ್ ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್ ಎಂಬುದು ಅಫೆಲೆಂಚೊಯಿಡಿಯಾ ಮತ್ತು ಕ್ಲೇಡ್ 102.5 ಎಂಬ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಗೆ ಸೇರಿದ ಕ್ವಾರಂಟೈನ್ ಸಸ್ಯ-ಪರಾವಲಂಬಿ ನೆಮಟೋಡ್ ಆಗಿದೆ. ನೆಮಟೋಡ್ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳನ್ನು ತಿನ್ನುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪೈನ್ ಮರಗಳ ಮರದ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ನಾಲ್ಕು ವಿಭಿನ್ನ ಲಾರ್ವಾ ಹಂತಗಳಾಗಿ ಬೆಳೆಯುತ್ತದೆ: L1, L2, L3, L4 ಮತ್ತು ವಯಸ್ಕ ವ್ಯಕ್ತಿ1,6. ಆಹಾರದ ಕೊರತೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್ ವಿಶೇಷ ಲಾರ್ವಾ ಹಂತಕ್ಕೆ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ - ಡೌಯರ್, ಇದು ಅದರ ವಾಹಕ - ಪೈನ್ ತೊಗಟೆ ಜೀರುಂಡೆ (ಮೊನೊಚಾಮಸ್ ಆಲ್ಟರ್ನೇಟಸ್) ಅನ್ನು ಪರಾವಲಂಬಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರೋಗ್ಯಕರ ಪೈನ್ ಮರಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. ಆರೋಗ್ಯಕರ ಆತಿಥೇಯರಲ್ಲಿ, ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳು ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಮೂಲಕ ತ್ವರಿತವಾಗಿ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರೆಂಚೈಮ್ಯಾಟಸ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತಿನ್ನುತ್ತವೆ, ಇದು ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ ಒಂದು ವರ್ಷದೊಳಗೆ ಹಲವಾರು ಅತಿಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು, ಪೈನ್ ಒಣಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ1,7,8.
ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಜೈವಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಬಹಳ ಹಿಂದಿನಿಂದಲೂ ಒಂದು ಸವಾಲಾಗಿದೆ, 20 ನೇ ಶತಮಾನದ ಕ್ವಾರಂಟೈನ್ ಕ್ರಮಗಳು ಹಿಂದಿನಿಂದಲೂ ಇವೆ. ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಪ್ರಸ್ತುತ ತಂತ್ರಗಳು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ರಾಸಾಯನಿಕ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಮರದ ಧೂಮೀಕರಣ ಮತ್ತು ಮರದ ಕಾಂಡಗಳಲ್ಲಿ ನೆಮಟಿಸೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಅಳವಡಿಸುವುದು ಸೇರಿವೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ನೆಮಟಿಸೈಡ್‌ಗಳು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಬೆಂಜೊಯೇಟ್, ಇವು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಕುಟುಂಬಕ್ಕೆ ಸೇರಿವೆ. ಈ ದುಬಾರಿ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳು ಅನೇಕ ನೆಮಟೋಡ್ ಪ್ರಭೇದಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಪರಿಸರಕ್ಕೆ ಸುರಕ್ಷಿತವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ9. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ನೆಮಟಿಸೈಡ್‌ಗಳ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಬಳಕೆಯು ಆಯ್ಕೆಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಬಹುತೇಕ ಖಚಿತವಾಗಿ ನಿರೋಧಕ ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಹೊರಹೊಮ್ಮುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಲೆಪ್ಟಿನೋಟಾರ್ಸಾ ಡೆಸೆಮ್ಲಿನೇಟಾ, ಪ್ಲುಟೆಲ್ಲಾ ಕ್ಸೈಲೋಸ್ಟೆಲ್ಲಾ ಮತ್ತು ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಾದ ಟ್ರೈಕೊಸ್ಟ್ರಾಂಗೈಲಸ್ ಕೊಲುಬ್ರಿಫಾರ್ಮಿಸ್ ಮತ್ತು ಆಸ್ಟರ್ಟೇಜಿಯಾ ಸರ್ಕಮ್‌ಸಿಂಕ್ಟಾ, ಇವು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ಗಳಿಗೆ ಕ್ರಮೇಣ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿವೆ10,11,12. ಆದ್ದರಿಂದ, ಪಿವಿಡಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಪರ್ಯಾಯ, ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಸ್ನೇಹಿ ಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಪ್ರತಿರೋಧ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನಿಯಮಿತವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ನೆಮಟಿಸೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕು. ಇತ್ತೀಚಿನ ದಶಕಗಳಲ್ಲಿ, ಹಲವಾರು ಲೇಖಕರು ಸಸ್ಯದ ಸಾರಗಳು, ಸಾರಭೂತ ತೈಲಗಳು ಮತ್ತು ಬಾಷ್ಪಶೀಲ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ನೆಮಟೋಡ್ ನಿಯಂತ್ರಣ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಿದ್ದಾರೆ 13,14,15,16.
ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ನಾವು ಕೈನೊರ್ಹ್ಯಾಬ್ಡಿಟಿಸ್ ಎಲಿಗನ್ಸ್ 17 ರಲ್ಲಿ ಅಂತರ್ಕೋಶೀಯ ಮತ್ತು ಅಂತರ್ ಸಾಮ್ರಾಜ್ಯ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅಣುವಾದ ಇಂಡೋಲ್‌ನ ನೆಮ್ಯಾಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಇಂಡೋಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಪರಿಸರ ವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶ ಸಂಕೇತವಾಗಿದ್ದು, ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ, ಬೀಜಕ ರಚನೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಸ್ಥಿರತೆ, ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧ, ಬಯೋಫಿಲ್ಮ್ ರಚನೆ ಮತ್ತು ವೈರಲೆನ್ಸ್ 18, 19 ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹಲವಾರು ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ. ಇತರ ರೋಗಕಾರಕ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ವಿರುದ್ಧ 34 ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳ ನೆಮ್ಯಾಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ, ಸಮಯ-ವಿಳಂಬ ಛಾಯಾಗ್ರಹಣ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಡಾಕಿಂಗ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲವಾದ 5-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಬೀಜ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಸ್ಯಗಳ ಮೇಲೆ ಅದರ ವಿಷಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ನೆಮಟಿಸೈಡಲ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುವ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು (> 1.0 mM) ಇಂಡೋಲ್ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಈ ಹಿಂದೆ ವರದಿಯಾಗಿದೆ17. ಇಂಡೋಲ್ ಅಥವಾ 33 ವಿಭಿನ್ನ ಇಂಡೋಲ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್ (ಮಿಶ್ರ ಜೀವಿತಾವಧಿ) ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು 1 mM ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಿದ ನಂತರ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಂತ ಮತ್ತು ಸತ್ತ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಎಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್‌ನ ಮರಣ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಐದು ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ನೆಮಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದವು; ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯು 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ 95 ± 7% ಆಗಿತ್ತು. ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾದ 34 ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, 1 mM ನಲ್ಲಿ 5-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು 4-ಫ್ಲೋರೋಯಿಂಡೋಲ್ 100% ಮರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಆದರೆ 5,6-ಡಿಫ್ಲೋರೋಯಿಂಡಿಗೋ, ಮೀಥೈಲಿಂಡೋಲ್-7-ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲೇಟ್ ಮತ್ತು 7-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಸರಿಸುಮಾರು 50% ಮರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 1).
ಪೈನ್ ಮರದ ನೆಮಟೋಡ್‌ನ ನಿರ್ವಾತ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಪರಿಣಾಮ. (A) ವಯಸ್ಕ ಗಂಡು ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಪರಿಣಾಮ, (B) L1 ಹಂತದ ನೆಮಟೋಡ್ ಮೊಟ್ಟೆಗಳು ಮತ್ತು (C) ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್‌ನ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆ, (i) ನಿರ್ವಾತಗಳನ್ನು 0 ಗಂಟೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ, ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು (ii) ನಿರ್ವಾತಗಳು, (iii) ಬಹು ನಿರ್ವಾತಗಳ ಸಂಗ್ರಹ, (iv) ನಿರ್ವಾತಗಳ ಊತ, (v) ನಿರ್ವಾತಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನ ಮತ್ತು (vi) ದೈತ್ಯ ನಿರ್ವಾತಗಳ ರಚನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಕೆಂಪು ಬಾಣಗಳು ನಿರ್ವಾತಗಳ ಊತವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ನೀಲಿ ಬಾಣಗಳು ನಿರ್ವಾತಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಪ್ಪು ಬಾಣಗಳು ದೈತ್ಯ ನಿರ್ವಾತಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 50 μm.
ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೀಥೇನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಸಾವಿನ ಅನುಕ್ರಮ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಹ ವಿವರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 4C). ಮೆಥನೋಜೆನಿಕ್ ಸಾವು ಪ್ರಮುಖ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಸಂಗ್ರಹದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಅಲ್ಲದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನ ಒಂದು ವಿಧವಾಗಿದೆ27. ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದ ದೋಷಗಳು ಮೀಥೇನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಸಾವಿನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ತೋರುತ್ತದೆ. ವಿವಿಧ ಸಮಯಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯು 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ (0.1 mM) ಗೆ 20 ಗಂಟೆಗಳ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ ದೈತ್ಯ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ರೂಪುಗೊಂಡಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. 8 ಗಂಟೆಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 12 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಅವುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು. 14 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಹಲವಾರು ದೊಡ್ಡ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. 12-16 ಗಂಟೆಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಹಲವಾರು ಸಮ್ಮಿಳನ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಗೋಚರಿಸಿದವು, ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನವು ಮೆಥನೋಜೆನಿಕ್ ಸಾವಿನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಆಧಾರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. 20 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, ವರ್ಮ್‌ನಾದ್ಯಂತ ಹಲವಾರು ದೈತ್ಯ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಕಂಡುಬಂದವು. ಈ ಅವಲೋಕನಗಳು ಸಿ. ಎಲೆಗನ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಮೆಟುಯೋಸಿಸ್‌ನ ಮೊದಲ ವರದಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಹುಳುಗಳಲ್ಲಿ, ನಿರ್ವಾತ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಛಿದ್ರತೆಯನ್ನು ಸಹ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 5), ಹುಳು ಬಾಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ವಾತವು ಪರಿಸರಕ್ಕೆ ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುವುದರಿಂದ ಇದು ಸಾಕ್ಷಿಯಾಗಿದೆ. ಮೊಟ್ಟೆಯ ಚಿಪ್ಪಿನ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಾತದ ಅಡ್ಡಿಯೂ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮೊಟ್ಟೆಯೊಡೆಯುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ L2 ನಿಂದ ಹಾಗೆಯೇ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S2). ಈ ಅವಲೋಕನಗಳು ನಿರ್ವಾತ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಸಪ್ಪುರೇಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ದ್ರವದ ಶೇಖರಣೆ ಮತ್ತು ಆಸ್ಮೋರ್ಗ್ಯುಲೇಟರಿ ವೈಫಲ್ಯ, ಹಾಗೆಯೇ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಸೆಲ್ ಗಾಯ (RCI) ದ ಒಳಗೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 5).
ಗಮನಿಸಿದ ನಿರ್ವಾತ ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಅಯೋಡಿನ್‌ನ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಊಹಿಸುತ್ತಾ, ನಾವು ಸೋಡಿಯಂ ಅಯೋಡೈಡ್ (NaI) ಮತ್ತು ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (KI) ನ ನಿಮಾಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ (0.1, 0.5 ಅಥವಾ 1 mM), ಅವು ನೆಮಟೋಡ್ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ನಿರ್ವಾತ ರಚನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S5), ಆದಾಗ್ಯೂ 1 mM KI ಸ್ವಲ್ಪ ನೆಮಟಿಸೈಡಲ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, 5-ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್‌ನಂತೆ 7-ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ (1 ಅಥವಾ 2 mM), ಬಹು ನಿರ್ವಾತಗಳು ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ವಿರೂಪಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S6). ಎರಡು ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಫಿನೋಟೈಪಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು, ಆದರೆ NaI ಮತ್ತು KI ಮಾಡಲಿಲ್ಲ. ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಡೋಲ್ ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಾತ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲಿಲ್ಲ (ಡೇಟಾ ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ). ಹೀಗಾಗಿ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಇಂಡೋಲ್-ಅಯೋಡಿನ್ ಸಂಕೀರ್ಣವು ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್‌ನ ನಿರ್ವಾತೀಕರಣ ಮತ್ತು ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸಿತು.
ನೆಮ್ಯಾಟಿಸೈಡಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾದ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ -5.89 kcal/mol ನ ಅತ್ಯಧಿಕ ಸ್ಲಿಪ್ ಸೂಚ್ಯಂಕವನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು, ನಂತರ 7-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ (-4.48 kcal/mol), 4-ಫ್ಲೋರೋಇಂಡೋಲ್ (-4.33), ಮತ್ತು ಇಂಡೋಲ್ (-4.03) (ಚಿತ್ರ 6). 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಲ್ಯೂಸಿನ್ 218 ನ ಬಲವಾದ ಬೆನ್ನೆಲುಬು ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧವು ಅದರ ಬಂಧವನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಇಂಡೋಲ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಸೈಡ್ ಚೈನ್ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳ ಮೂಲಕ ಸೆರಿನ್ 260 ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ. ಇತರ ಮಾದರಿಯ ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, 2-ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ -5.248 kcal/mol ಬಂಧಕ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಲ್ಯೂಸಿನ್ 218 ರೊಂದಿಗಿನ ಅದರ ಮುಖ್ಯ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧದಿಂದಾಗಿ. ಇತರ ತಿಳಿದಿರುವ ಬಂಧಗಳಲ್ಲಿ 3-ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ (-4.3 kcal/mol), 4-ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ (-4.0 kcal/mol), ಮತ್ತು 6-ಫ್ಲೋರೋಇಂಡೋಲ್ (-2.6 kcal/mol) ಸೇರಿವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S8). 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು 2-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಹೊರತುಪಡಿಸಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಡೋಲ್ ಸ್ವತಃ ಸೆರಿನ್ 260 ನೊಂದಿಗೆ ಬಂಧವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ. ಐವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ಗೆ ಗಮನಿಸಿದಂತೆ, ಲ್ಯೂಸಿನ್ 218 ರೊಂದಿಗಿನ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧವು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಗ್ರಾಹಕ-ಲಿಗಂಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S7), ಐವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ನಂತೆ 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು 2-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್, ಲ್ಯೂಸಿನ್ 218 ಮೂಲಕ ಗ್ಲುಸಿಎಲ್ ಗ್ರಾಹಕದ ಸಕ್ರಿಯ ಸೈಟ್‌ಗೆ ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 6 ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S8). ಗ್ಲುಸಿಎಲ್ ಸಂಕೀರ್ಣದ ತೆರೆದ ರಂಧ್ರ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಮತ್ತು ಗ್ಲುಸಿಎಲ್ ಗ್ರಾಹಕದ ಸಕ್ರಿಯ ಸೈಟ್‌ಗೆ ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ, 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್, 2-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್, ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಐವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಅಯಾನು ಚಾನಲ್ ಅನ್ನು ತೆರೆದಿಡಲು ಮತ್ತು ದ್ರವ ಸೇವನೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲು ಈ ಬಂಧವು ಅಗತ್ಯವಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್ ಅನ್ನು GluCL ಗೆ ಆಣ್ವಿಕ ಡಾಕಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದು. (A) ಇಂಡೋಲ್, (B) 4-ಫ್ಲೋರೋಇಂಡೋಲ್, (C) 7-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು (D) 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳನ್ನು GluCL ನ ಸಕ್ರಿಯ ಸ್ಥಳಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುವ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಗಳು. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ರಿಬ್ಬನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬೆನ್ನೆಲುಬಿನ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಹಳದಿ ಚುಕ್ಕೆಗಳ ರೇಖೆಗಳಾಗಿ ತೋರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. (A′), (B′), (C′), ಮತ್ತು (D′) ಸುತ್ತಮುತ್ತಲಿನ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲದ ಅವಶೇಷಗಳೊಂದಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪಕ್ಕ-ಸರಪಳಿ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಗುಲಾಬಿ ಚುಕ್ಕೆಗಳ ಬಾಣಗಳಿಂದ ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಎಲೆಕೋಸು ಮತ್ತು ಮೂಲಂಗಿ ಬೀಜಗಳ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ವಿಷಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ (0.05 ಅಥವಾ 0.1 mM) ಅಥವಾ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ (10 μg/mL) ಆರಂಭಿಕ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಗಳ ಹೊರಹೊಮ್ಮುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ಯಾವುದೇ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 7). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಅಥವಾ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಬೀಜಗಳ ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ. ಟ್ಯಾಪ್‌ರೂಟ್ ಉದ್ದೀಕರಣ ಮತ್ತು ರೂಪುಗೊಂಡ ಪಾರ್ಶ್ವ ಬೇರುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಮೇಲಿನ ಪರಿಣಾಮವು ಅತ್ಯಲ್ಪವಾಗಿತ್ತು, ಆದಾಗ್ಯೂ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ 1 mM (ಅದರ ಸಕ್ರಿಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯ 10 ಪಟ್ಟು) ಪಾರ್ಶ್ವ ಬೇರುಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಸ್ವಲ್ಪ ವಿಳಂಬಗೊಳಿಸಿತು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲ ಮತ್ತು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಸ್ಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಬೀಜ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಪರಿಣಾಮ. ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಅಥವಾ 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬಿ. ಒಲೆರೇಸಿಯಾ ಮತ್ತು ಆರ್. ರಫನಿಸ್ಟ್ರಮ್ ಬೀಜಗಳ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ, ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪಾರ್ಶ್ವ ಬೇರೂರಿಸುವಿಕೆ. 22°C ನಲ್ಲಿ 3 ದಿನಗಳ ಕಾವು ನಂತರ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳಿಂದ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಹತ್ಯೆಯ ಹಲವಾರು ಪ್ರಕರಣಗಳನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, ಪೈನ್ ಸೂಜಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ ಪ್ರೇರಿತ ಮೆತಿಲೀಕರಣದ (ಸಣ್ಣ ನಿರ್ವಾತಗಳು ಕ್ರಮೇಣ ದೈತ್ಯ ನಿರ್ವಾತಗಳಾಗಿ ವಿಲೀನಗೊಂಡು, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಪೊರೆಯ ಛಿದ್ರ ಮತ್ತು ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಶೇಖರಣೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ) ಮೊದಲ ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಅಯೋಡೈಂಡೋಲ್ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕ ನೆಮಟಿಸೈಡ್ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ನಂತೆಯೇ ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ನೆಮಟಿಸೈಡ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.
ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಪ್ರೊಕಾರ್ಯೋಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬಯೋಫಿಲ್ಮ್ ಪ್ರತಿಬಂಧ/ರಚನೆ, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕತೆ ಸೇರಿದಂತೆ ಬಹು ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಈ ಹಿಂದೆ ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು, ಇಂಡೋಲ್ ಆಲ್ಕಲಾಯ್ಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅರೆ-ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಇಂಡೋಲ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪರಿಣಾಮಗಳು ವ್ಯಾಪಕ ಸಂಶೋಧನಾ ಆಸಕ್ತಿಯನ್ನು ಆಕರ್ಷಿಸಿವೆ35,36,37. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ನಿರಂತರ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಮತ್ತು ಸ್ಟ್ಯಾಫಿಲೋಕೊಕಸ್ ಔರೆಸ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ37. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇತರ ಜಾತಿಗಳು, ಕುಲಗಳು ಮತ್ತು ಸಾಮ್ರಾಜ್ಯಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವುದು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಆಸಕ್ತಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಈ ಗುರಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸುವತ್ತ ಒಂದು ಹೆಜ್ಜೆಯಾಗಿದೆ.
ಇಲ್ಲಿ, ನಾವು C. ಎಲೆಗನ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್-ಪ್ರೇರಿತ ಮಾರಕತೆಗೆ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಸೆಲ್ ಗಾಯ (RCI) ಮತ್ತು ಮೀಥೈಲೇಷನ್ (ಚಿತ್ರಗಳು 4C ಮತ್ತು 5) ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಒಂದು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸುತ್ತೇವೆ. ಪಫಿನೆಸ್ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲಾರ್ ಡಿಜೆನರೇಶನ್‌ನಂತಹ ಎಡಿಮಾಟಸ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳು RCI ಮತ್ತು ಮೀಥೈಲೇಷನ್‌ನ ಸೂಚಕಗಳಾಗಿವೆ, ಇದು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ದೈತ್ಯ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ48,49. ATP ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ, ATPase ಪಂಪ್‌ನ ವೈಫಲ್ಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು Na+, Ca2+ ಮತ್ತು ನೀರಿನ 50,51,52 ರ ತ್ವರಿತ ಒಳಹರಿವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಮೂಲಕ RCI ಶಕ್ತಿ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ. Ca2+ ಮತ್ತು ನೀರಿನ 53 ರ ಒಳಹರಿವಿನಿಂದ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ದ್ರವದ ಶೇಖರಣೆಯ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪ್ರಾಣಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟ್ರಾಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಉದ್ಭವಿಸುತ್ತವೆ. ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಹಾನಿ ತಾತ್ಕಾಲಿಕವಾಗಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅವಧಿಗೆ ATP ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ಹಾನಿಯ ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಹಾನಿ ಮುಂದುವರಿದರೆ ಅಥವಾ ಹದಗೆಟ್ಟರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸಾಯುತ್ತವೆ. 54 ನಮ್ಮ ಅವಲೋಕನಗಳು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳು ಒತ್ತಡದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ ಸಾಮಾನ್ಯ ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪುನಃಸ್ಥಾಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.
ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್‌ನಲ್ಲಿ 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅಯೋಡಿನ್‌ನ ಉಪಸ್ಥಿತಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಆಣ್ವಿಕ ವಿತರಣೆಯಿಂದಾಗಿರಬಹುದು, ಏಕೆಂದರೆ 7-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಬಿ. ಕ್ಸೈಲೋಫಿಲಸ್ ಮೇಲೆ 5-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1 ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S6). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮಾಲ್ಟೀಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ಅಧ್ಯಯನಗಳೊಂದಿಗೆ ಭಾಗಶಃ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ. (2014), ಅವರು ಇಂಡೋಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಪಿರಿಡೈಲ್ ಸಾರಜನಕದ ಭಾಗವನ್ನು ಪ್ಯಾರಾ-ದಿಂದ ಮೆಟಾ-ಸ್ಥಾನಕ್ಕೆ ಸ್ಥಳಾಂತರಿಸುವುದು U251 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಾತೀಕರಣ, ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಮತ್ತು ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ, ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಕ್ರಿಯ ಸೈಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಣುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ27,44,45. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾದ ಇಂಡೋಲ್ ಅಥವಾ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ಲುಸಿಎಲ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಈ ಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ, ಏಕೆಂದರೆ 5- ಮತ್ತು 2-ಐಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ಇತರ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬಲವಾಗಿ ಗ್ಲುಸಿಎಲ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ಚಿತ್ರ 6 ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ S8). ಇಂಡೋಲ್‌ನ ಎರಡನೇ ಅಥವಾ ಐದನೇ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿರುವ ಅಯೋಡಿನ್ ಬೆನ್ನೆಲುಬಿನ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳ ಮೂಲಕ GluCL ಗ್ರಾಹಕದ ಲ್ಯೂಸಿನ್ 218 ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಇತರ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನೇಟೆಡ್ ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಡೋಲ್ ಸ್ವತಃ ಸೆರಿನ್ 260 ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲ ಸೈಡ್-ಚೈನ್ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 6). ಆದ್ದರಿಂದ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನ್‌ನ ಸ್ಥಳೀಕರಣವು ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲಾರ್ ಡಿಜೆನರೇಶನ್‌ನ ಪ್ರಚೋದನೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸುತ್ತೇವೆ, ಆದರೆ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಬಿಗಿಯಾದ ಬಂಧನವು ಅಯಾನು ಚಾನಲ್ ಅನ್ನು ತೆರೆದಿಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ತ್ವರಿತ ದ್ರವ ಒಳಹರಿವು ಮತ್ತು ವ್ಯಾಕ್ಯೂಲ್ ಛಿದ್ರವಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯ ವಿವರವಾದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.
5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೊದಲು, ಸಸ್ಯಗಳ ಮೇಲೆ ಅದರ ವಿಷಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬೇಕು. ನಮ್ಮ ಬೀಜ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಬೀಜ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಅಥವಾ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ನಂತರದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7). ಹೀಗಾಗಿ, ಪೈನ್ ಮರಗಳಿಗೆ ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳ ಹಾನಿಕಾರಕತೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಪರಿಸರ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಒಂದು ಆಧಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.
ಹಿಂದಿನ ವರದಿಗಳು ಇಂಡೋಲ್ ಆಧಾರಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಪ್ರತಿಜೀವಕ ಪ್ರತಿರೋಧ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಗತಿಯ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಒಂದು ಸಂಭಾವ್ಯ ವಿಧಾನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ55. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇಂಡೋಲ್‌ಗಳು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ವಿರೋಧಿ, ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ, ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ, ಉರಿಯೂತ ವಿರೋಧಿ, ಮಧುಮೇಹ ವಿರೋಧಿ, ಆಂಟಿವೈರಲ್, ಆಂಟಿಪ್ರೊಲಿಫೆರೇಟಿವ್ ಮತ್ತು ಕ್ಷಯರೋಗ ವಿರೋಧಿ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು ಔಷಧ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಭರವಸೆಯ ಆಧಾರವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು56,57. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಅಯೋಡಿನ್‌ನ ಪರಾವಲಂಬಿ ವಿರೋಧಿ ಮತ್ತು ಆಂಥೆಲ್ಮಿಂಟಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಅವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಅನ್ನು ಮೂರು ದಶಕಗಳ ಹಿಂದೆ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 2015 ರಲ್ಲಿ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ಗೆದ್ದುಕೊಂಡಿತು ಮತ್ತು ಆಂಥೆಲ್ಮಿಂಟಿಕ್ ಆಗಿ ಇದರ ಬಳಕೆಯು ಇನ್ನೂ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಮುಂದುವರೆದಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕೀಟ ಕೀಟಗಳಲ್ಲಿ ಅವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧದ ತ್ವರಿತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಿಂದಾಗಿ, ಪೈನ್ ಮರಗಳಲ್ಲಿ PWN ಸೋಂಕನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಪರ್ಯಾಯ, ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಸ್ನೇಹಿ ತಂತ್ರದ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು 5-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಪೈನ್ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಮತ್ತು 5-ಅಯೋಡೋಯಿಂಡೋಲ್ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಅದರ ಭವಿಷ್ಯದ ವಾಣಿಜ್ಯ ಅನ್ವಯಕ್ಕೆ ಉತ್ತಮ ನಿರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ.
ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಕೊರಿಯಾದ ಜಿಯೊಂಗ್ಸಾನ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಯೆಂಗ್ನಮ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ನೈತಿಕ ಸಮಿತಿಯು ಅನುಮೋದಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಯೆಂಗ್ನಮ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ನೈತಿಕ ಸಮಿತಿಯ ಮಾರ್ಗಸೂಚಿಗಳಿಗೆ ಅನುಸಾರವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಸ್ಥಾಪಿತ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೊಟ್ಟೆಯ ಕಾವು ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು43. ಮೊಟ್ಟೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ದರಗಳನ್ನು (HR) ನಿರ್ಣಯಿಸಲು, 1 ದಿನದ ವಯಸ್ಕ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳನ್ನು (ಸರಿಸುಮಾರು 100 ಹೆಣ್ಣು ಮತ್ತು 100 ಗಂಡು) ಶಿಲೀಂಧ್ರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೆಟ್ರಿ ಭಕ್ಷ್ಯಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬೆಳೆಯಲು ಬಿಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಮೊಟ್ಟೆಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ (0.05 mM ಮತ್ತು 0.1 mM) ಅಥವಾ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ (10 μg/ml) ನೊಂದಿಗೆ ಬರಡಾದ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ಅಮಾನತುಗಳನ್ನು (500 μl; ಸರಿಸುಮಾರು 100 ಮೊಟ್ಟೆಗಳು) 24-ಬಾವಿ ಅಂಗಾಂಶ ಕೃಷಿ ತಟ್ಟೆಯ ಬಾವಿಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 22 °C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ L2 ಎಣಿಕೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಆದರೆ ಉತ್ತಮ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ತಂತಿಯಿಂದ ಉತ್ತೇಜಿಸಿದಾಗ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಚಲಿಸದಿದ್ದರೆ ಸತ್ತವು ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಎರಡು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿಯೊಂದಕ್ಕೂ ಆರು ಪುನರಾವರ್ತನೆಗಳೊಂದಿಗೆ. ಎರಡೂ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. HR ನ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ:
ಹಿಂದೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲಾರ್ವಾಗಳ ಮರಣ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ನೆಮಟೋಡ್ ಮೊಟ್ಟೆಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು ಬರಡಾದ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಮೊಟ್ಟೆಯೊಡೆದು L2 ಹಂತದ ಲಾರ್ವಾಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಿದ ಲಾರ್ವಾಗಳನ್ನು (ಸರಿಸುಮಾರು 500 ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳು) 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ (0.05 mM ಮತ್ತು 0.1 mM) ಅಥವಾ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ (10 μg/ml) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು B. ಸಿನೆರಿಯಾ ಪೆಟ್ರಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. 22 °C ನಲ್ಲಿ 48 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬರಡಾದ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ L2, L3 ಮತ್ತು L4 ಹಂತಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. L3 ಮತ್ತು L4 ಹಂತಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ಲಾರ್ವಾ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ L2 ಹಂತದ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ಯಾವುದೇ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ. iRiS™ ಡಿಜಿಟಲ್ ಸೆಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಬಳಸಿ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಈ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಎರಡು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಆರು ಪುನರಾವರ್ತನೆಗಳೊಂದಿಗೆ. ಎರಡೂ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಯಿತು.
ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಬೀಜಗಳಿಗೆ 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಮತ್ತು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ನ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು.62 ಬಿ. ಒಲೆರೇಸಿಯಾ ಮತ್ತು ಆರ್. ರಫನಿಸ್ಟ್ರಮ್ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಮೊದಲು ಒಂದು ದಿನ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಿ, 1 ಮಿಲಿ 100% ಎಥೆನಾಲ್‌ನಿಂದ ತೊಳೆದು, 1 ಮಿಲಿ 50% ವಾಣಿಜ್ಯ ಬ್ಲೀಚ್ (3% ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಪೋಕ್ಲೋರೈಟ್) ನಿಂದ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಮಾಡಿ, ಮತ್ತು 1 ಮಿಲಿ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ನೀರಿನಿಂದ ಐದು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಮಾಡಿದ ಬೀಜಗಳನ್ನು 0.86 ಗ್ರಾಂ/ಲೀ (0.2X) ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮ ಮತ್ತು 0.7% ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯೊಲಾಜಿಕಲ್ ಅಗರ್ ಅನ್ನು 5-ಅಯೋಡೋಇಂಡೋಲ್ ಅಥವಾ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ಹೊಂದಿರುವ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಒತ್ತಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು 22 °C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 3 ದಿನಗಳ ಕಾವುಕೊಟ್ಟ ನಂತರ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಯಿತು. ಈ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಎರಡು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಆರು ಪುನರಾವರ್ತನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು.