ಸಸ್ಯ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹೊಸ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಾಗಿ ಉರ್ಸಾ ಮೊನೊಮೈಡ್‌ಗಳ ಅನ್ವೇಷಣೆ, ಗುಣಲಕ್ಷಣ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಸುಧಾರಣೆ.

Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ, ನಿಮ್ಮ ಬ್ರೌಸರ್‌ನ ಹೊಸ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ).ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಡೆಯುತ್ತಿರುವ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಸ್ಟೈಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತಿದ್ದೇವೆ.
ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ಬಳಕೆಯು ಮಾನವ ಜೀವನವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಕಳೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಅಗತ್ಯತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಕ್ರಿಯೆಯ ಹೊಸ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ನಿಂದ N-ಅಲ್ಕೋಕ್ಸಿಪೈರೋಲ್ ಸಂಯುಕ್ತ, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಮೂಲಕ, ಉರ್ಸ್-ಮೊನೊಅಮಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಉರ್ಸ್-ಮೊನೊಮೈಡ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ.ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಹೆಲಾ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಋಣಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರದೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಉರ್ಬೆನೈಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನ (ಯುಡಿಎ) ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಅರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ನಾವು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಸಸ್ಯ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ;ಜೊತೆಗೆ, KAND ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ;ಈ ಬಹುಮುಖಿ ಪರಿಣಾಮಗಳು ತಿಳಿದಿರುವ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಂದ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಹೊಸ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಹೊಸ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅನ್ವಯವು ಮಾನವ ಜೀವನದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ.ಸೂಕ್ಷ್ಮಾಣುಜೀವಿಗಳು, ಸಸ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಕೀಟಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಔಷಧ ಮತ್ತು ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಗತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿವೆ.ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಅನೇಕ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳು ಮತ್ತು ಆಂಟಿ-ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಜೊತೆಗೆ, ವಿವಿಧ ರೀತಿಯಕೀಟನಾಶಕಗಳು, ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಈ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕಗಳು ಮತ್ತು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಕಳೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳು ಆಧುನಿಕ ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಈಗಾಗಲೇ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ದ್ಯುತಿಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲ ಚಯಾಪಚಯ, ಕೋಶ ಗೋಡೆಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಮಿಟೋಸಿಸ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಫೈಟೊಹಾರ್ಮೋನ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಂತಹ ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿನ ಹಲವಾರು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುರಿಗಳೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ವರ್ಗವಾಗಿದ್ದು, ಮೈಟೊಟಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಮೂಲಕ ಸಸ್ಯದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ಘಟಕಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಹೆಟೆರೊಡೈಮರ್ α-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಮತ್ತು β-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಲೀನಿಯರ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಪ್ರೊಟೊಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ 13 ಪ್ರೊಟೊಫಿಲಮೆಂಟ್‌ಗಳು ಸಿಲಿಂಡರಾಕಾರದ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ.ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ, ಕೋಶ ವಿಭಜನೆ ಮತ್ತು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಗಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವುದು ಸೇರಿದಂತೆ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳು ಬಹು ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ.ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳು ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯ ಕೆಳಗೆ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೂಲಕ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಮೈಕ್ರೋಫೈಬ್ರಿಲ್ಗಳ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ.ರೂಟ್ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು, ಮೂಲ ತುದಿಯ ಕ್ಷಿಪ್ರ ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿ ಇರುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಮೈಕ್ರೋಫೈಬರ್‌ಗಳು ಈ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬುಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅನಿಸೊಟ್ರೊಪಿಕ್ ಕೋಶದ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವು ಸಸ್ಯ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ.ಜೀನ್‌ಗಳ ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್‌ನಲ್ಲಿನ ಅಮಿನೊ ಆಸಿಡ್ ಬದಲಿಗಳು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಅರೇಗಳ ಓರೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ 6,7 ರಲ್ಲಿ ಎಡ ಅಥವಾ ಬಲ-ಬದಿಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ.ಅಂತೆಯೇ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೊಟೀನ್ಗಳಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ವಿಕೃತ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು8,9,10,11,12,13.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಪ್ರಿಟಿಲಾಕ್ಲೋರ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್‌ನಂತಹ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಅಡಚಣೆಯ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಎಡ-ಬದಿಯ ಓರೆಯಾದ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕ್ರಿಯೆಯ ನಿಖರವಾದ ನಿಯಂತ್ರಣವು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಈ ಔಷಧಿಗಳು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ಕೊಡುಗೆಗಳನ್ನು ನೀಡಿವೆ, ಜೊತೆಗೆ ಕೃಷಿ ಮತ್ತು ಔಷಧ2.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಒರಿಜಲಿನ್, ಡೈನಿಟ್ರೊಅನಿಲಿನ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು, ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್, ಬೆಂಜಮೈಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಸಾದೃಶ್ಯಗಳು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಆ ಮೂಲಕ ಸಸ್ಯದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಅವುಗಳನ್ನು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳು ಸಸ್ಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ಗಳು ಎರಡೂ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳಿಗೆ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಆಗಿರುತ್ತವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳೆಂದು ಗುರುತಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಉಪಯುಕ್ತತೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಸೀಮಿತ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಆಂಟಿಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ಕುಟುಂಬದ ಕುಲವಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಏರೋಬಿಕ್, ಗ್ರಾಂ-ಪಾಸಿಟಿವ್, ಫಿಲಾಮೆಂಟಸ್ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು ಸೇರಿವೆ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕೆ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಹೆಸರುವಾಸಿಯಾಗಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದು ಹೊಸ ಜೈವಿಕವಾಗಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಮೂಲಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ.ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸೆಸ್ ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಮತ್ತು S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ ISP 5486 ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ coumamonamide ಎಂಬ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ನಾವು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ. ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ರೋಹಿತ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, coumamonamide ನ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟ N-alkoxyelepyrr ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ.ಉರ್ಸ್ಮೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ, ಉರ್ಸ್ಮೊನೊಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರ, ಜನಪ್ರಿಯ ಮಾದರಿ ಸಸ್ಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧದ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾದ C9 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯುಕ್ತವು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ (KAND) ನಾನಿಲೋಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ.ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಹೊಸದಾಗಿ ಕಂಡುಹಿಡಿದ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ತಂಬಾಕು ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಿತು ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಅಥವಾ ಹೆಲಾ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಅಲ್ಲ.ಇದಲ್ಲದೆ, ಕೆಲವು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ವಿರೂಪಗೊಂಡ ಮೂಲ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ, ಈ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಕಲ್ಪನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಅಥವಾ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ನಮ್ಮ ಅವಲೋಕನಗಳು KAND ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕುಮಾಮೊಟೋನಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಮೈಕ್ರೋಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿತು.ಹೀಗಾಗಿ, ನಾವು ಹೊಸ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ, ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ನಾಶವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.
ಸ್ಟ್ರೈನ್ MK493-CF1 ಅನ್ನು ಟೋಕಿಯೊದ ಶಿನಾಗವಾ-ಕುದಲ್ಲಿ ಮಣ್ಣಿನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸ್ಟ್ರೈನ್ MK493-CF1 ಚೆನ್ನಾಗಿ ಕವಲೊಡೆದ ಸ್ಟ್ರೋಮಲ್ ಕವಕಜಾಲವನ್ನು ರೂಪಿಸಿತು.16S ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಜೀನ್‌ನ (1422 ಬಿಪಿ) ಭಾಗಶಃ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ತಳಿಯು S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್‌ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ವಿಶಿಷ್ಟ ಸ್ಟ್ರೈನ್, 99.93%).ಈ ಫಲಿತಾಂಶದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಈ ತಳಿಯು S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್‌ನ ವಿಧದ ತಳಿಯೊಂದಿಗೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಆದ್ದರಿಂದ, ನಾವು ತಾತ್ಕಾಲಿಕವಾಗಿ ಈ ತಳಿಯನ್ನು S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಿದ್ದೇವೆ.S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ ISP 5486T ಸಹ ಅದೇ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಸೂಕ್ಷ್ಮಾಣುಜೀವಿಯಿಂದ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವ ಬಗ್ಗೆ ಸ್ವಲ್ಪ ಆರಂಭಿಕ ಸಂಶೋಧನೆ ನಡೆದಿದ್ದರಿಂದ, ಮತ್ತಷ್ಟು ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಯಿತು.14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ 30 ° C ನಲ್ಲಿ ಘನ-ಸ್ಥಿತಿಯ ಹುದುಗುವಿಕೆಯಿಂದ ಬಾರ್ಲಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಅನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದ ನಂತರ, ಮಧ್ಯಮವನ್ನು 50% EtOH ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು.59.5 ಮಿಗ್ರಾಂ ಕಚ್ಚಾ ಸಾರವನ್ನು ಪಡೆಯಲು 60 ಮಿಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಒಣಗಿಸಲಾಗಿದೆ.N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, coumomonamide, 36.0 mg) ನೀಡಲು ಕಚ್ಚಾ ಸಾರವನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತದ HPLC ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು.1 ರ ಒಟ್ಟು ಮೊತ್ತವು ಕಚ್ಚಾ ಸಾರದ ಸರಿಸುಮಾರು 60% ಆಗಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ನಾವು ಕುಮಾಮೊಟೊಮೈಡ್ 1 ರ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ವಿವರವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ 1 ಬಿಳಿಯ ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ಪುಡಿ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (HRESIMS) C6H8N2O2 (Fig. 1) ಅನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಸಂಯುಕ್ತದ C2-ಬದಲಿಯಾಗಿರುವ ಪೈರೋಲ್ ತುಣುಕನ್ನು δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, 1H NMR 5 Hz ನಲ್ಲಿ δH:4. , H-5) ಮತ್ತು δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), ಮತ್ತು 13C NMR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ ನಾಲ್ಕು sp2 ಕಾರ್ಬನ್ ಪರಮಾಣುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.C2 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ಅಮೈಡ್ ಗುಂಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು C-3 ಪ್ರೋಟಾನ್‌ನಿಂದ δC 161.1 ನಲ್ಲಿ ಅಮೈಡ್ ಕಾರ್ಬೊನಿಲ್ ಕಾರ್ಬನ್‌ಗೆ HMBC ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧದಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, δH 4.10 (3H, S) ಮತ್ತು δC 68.3 ನಲ್ಲಿ 1 H ಮತ್ತು 13 C NMR ಶಿಖರಗಳು ಅಣುವಿನಲ್ಲಿ N-ಮೆಥಾಕ್ಸಿ ಗುಂಪುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ವರ್ಧಿತ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಓವರ್‌ಹೌಸರ್ ಸಂಕ್ಷೇಪಣ (NOEDF) ನಂತಹ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೆಥಾಕ್ಸಿ ಗುಂಪಿನ ಸರಿಯಾದ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಇನ್ನೂ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲವಾದರೂ, N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide ಮೊದಲ ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಸಂಯುಕ್ತವಾಯಿತು.
1 ರ ಸರಿಯಾದ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ಒಟ್ಟು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು (Fig. 2a).m-CPBA ನೊಂದಿಗೆ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ 2-ಅಮಿನೊಪಿರಿಡಿನ್ 2 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ ಅನುಗುಣವಾದ N-ಆಕ್ಸೈಡ್ 3 ಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.2 ರ 2-ಅಮಿನೊಆಜಿಡೇಶನ್ ನಂತರ, ಅಬ್ರಮೊವಿಚ್ ವಿವರಿಸಿದ ಸೈಕ್ಲೋಕಂಡೆನ್ಸೇಶನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು 90 ° C ನಲ್ಲಿ ಬೆಂಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ 1-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿ-1H-ಪೈರೋಲ್-2-ಕಾರ್ಬೊನೈಟ್ರೈಲ್ 5 ಗ್ರಾಂಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ವೇಗ 60% (ಎರಡು ಹಂತಗಳು).15,16.4 ರ ಮೆತಿಲೀಕರಣ ಮತ್ತು ಜಲವಿಚ್ಛೇದನವು 1-ಮೆಥಾಕ್ಸಿ-1H-ಪೈರೋಲ್-2-ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ("ಕ್ಯುಮೊಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ", 6 ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಉತ್ತಮ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ (70%, ಎರಡು ಹಂತಗಳು) ನೀಡಿತು.ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಆಸಿಡ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಮಧ್ಯಂತರ 6 ಮೂಲಕ ಜಲೀಯ ಅಮೋನಿಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 98% ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್ 1 ಅನ್ನು ನೀಡಿತು.ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ 1 ರ ಎಲ್ಲಾ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಡೇಟಾವು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ 1 ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ 1 ರ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ;
ಉರ್ಬೆನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅರ್ಬೆನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.(ಎ) ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್‌ನ ಒಟ್ಟು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ.(ಬಿ) ಏಳು-ದಿನ-ಹಳೆಯ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಕೊಲಂಬಿಯಾ (ಕೋಲ್) ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ (ಎಂಎಸ್) ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ 6 ಅಥವಾ ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ 1 ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.
ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ನಾವು ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಮಾಡ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕಾಗಿ ಅರ್ಬೆನಾಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗಳ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ.ನಾವು MS ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ursmonamide 1 ಅಥವಾ ursmonic acid 6 ನ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಈ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಿದ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾ ಮೊಳಕೆ.ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು 6 ರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು (500 μM) ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 2b).ಮುಂದೆ, ನಾವು 6 ರ N1 ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಬದಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಿವಿಧ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ರಚಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಮೇಲೆ ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ (ಅನಲಾಗ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪೋಷಕ ಮಾಹಿತಿ (SI) ನಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ).ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಸಸಿಗಳನ್ನು 50 μM ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೇರಿನ ಉದ್ದವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ.ಚಿತ್ರಗಳು 3a, b, ಮತ್ತು S1 ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಕೂಮಾಮೊ ಆಮ್ಲಗಳು N1 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ರೇಖೀಯ ಆಲ್ಕಾಕ್ಸಿ ಸರಪಳಿಗಳು (9, 10, 11, 12, ಮತ್ತು 13) ಅಥವಾ ದೊಡ್ಡ ಆಲ್ಕಾಕ್ಸಿ ಸರಪಳಿಗಳು (15, 16, ಮತ್ತು 17) ವಿಭಿನ್ನ ಉದ್ದಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, 200 μM 10, 11, ಅಥವಾ 17 ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (Fig. 3c ಮತ್ತು S2).
ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧದ ಅಧ್ಯಯನ.(ಎ) ಅನಲಾಗ್‌ಗಳ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಯೋಜನೆ.(b) 50 μM ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆಯೇ MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7-ದಿನದ ಸಸಿಗಳ ಬೇರಿನ ಉದ್ದದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಶಾಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).n>18. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.nt ಎಂದರೆ "ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ" ಏಕೆಂದರೆ 50% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬೀಜಗಳು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯಲಿಲ್ಲ.(ಸಿ) 200 μM ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾದ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಬೀಜಗಳ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವುದು.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಶಾಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿ-ಸ್ಕ್ವೇರ್ ಪರೀಕ್ಷೆ).n=96.
ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, C9 ಗಿಂತ ಉದ್ದವಾದ ಆಲ್ಕೈಲ್ ಸೈಡ್ ಚೈನ್‌ಗಳ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಕುಮಾಮೊಟೊಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಗೆ ಅವುಗಳ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಗಾತ್ರದ ಅಡ್ಡ ಸರಪಳಿಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು C9 ಅನ್ನು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ನಾನಿಲೋಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನವು (ಇನ್ನು ಮುಂದೆ KAND 11 ಎಂದು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಲಾಗಿದೆ) ಅತ್ಯಂತ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ನಾವು KAND 11 ನ ಹೆಚ್ಚು ವಿವರವಾದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ. ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆ 50 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಆದರೆ KAND 11 ರ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು (40, 30, 20, ಅಥವಾ 10 μM) ಡೋಸ್-ಅವಲಂಬಿತ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಬೇರು ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 4a, b).KAND 11 ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟೆಮ್ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು, ನಾವು ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ಮತ್ತು ಅಳತೆ ಮಾಡಿದ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಪ್ರದೇಶದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣ ಹೊಂದಿರುವ ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.25 μM KAND-11 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಸಸಿಗಳ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಗಾತ್ರವು 151.1 ± 32.5 μm ಆಗಿದ್ದರೆ, DMSO ಹೊಂದಿರುವ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಗಾತ್ರವು 264.7 ± 30.8 μm (ಚಿತ್ರ. 4c, , ಇದು KAND-11 ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಮರುಸ್ಥಾಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಹರಡುತ್ತಿದೆ.ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟೆಮ್.ಇದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕೋಶ ವಿಭಜನೆಯ ಗುರುತು CDKB2; 1p:: CDKB2; 1-GUS ಸಂಕೇತವನ್ನು ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟೆಮ್ (Fig. 4e) 17 ರಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಿತು.ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು KAND 11 ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ (ಉರ್ಬೆನೈಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು) ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.(a) KAND 11 ರ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7-ದಿನ-ಹಳೆಯ ಕಾಡು-ರೀತಿಯ ಕೋಲ್ ಮೊಳಕೆ. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.(ಬಿ) ಮೂಲ ಉದ್ದದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ.ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟುಕಿ ಎಚ್‌ಎಸ್‌ಡಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).n>16. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.(ಸಿ) 25 μM KAND ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆಯೇ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್-ಸ್ಟೇನ್ಡ್ ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಕೋಲ್ ರೂಟ್‌ಗಳ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ 11. ಬಿಳಿ ಬ್ರಾಕೆಟ್‌ಗಳು ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm.(ಡಿ) ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 10 ರಿಂದ 11).ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಪು< 0.05).ಬಾರ್‌ಗಳು ಸರಾಸರಿ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.(ಇ) CDKB2 ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಂಟರ್‌ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ (DIC) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ;1ಪ್ರೊ: CDKB2;25 µM KAND ಪರೀಕ್ಷೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆಯೇ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 5-ದಿನದ ಸಸಿಗಳ ಮೇಲೆ 1-GUS ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಕಲೆ ಹಾಕಲಾಗಿದೆ.
KAND 11 ರ ಫೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಮತ್ತೊಂದು ಡೈಕೋಟಿಲೆಡೋನಸ್ ಸಸ್ಯವಾದ ತಂಬಾಕು (ನಿಕೋಟಿಯಾನಾ ಟ್ಯಾಬಾಕಮ್) ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಭೂ ಸಸ್ಯ ಮಾದರಿ ಜೀವಿಗಳಾದ ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ (ಮಾರ್ಚಾಂಟಿಯಾ ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಾ) ಬಳಸಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.ಅರಾಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, 25 μM KAND 11 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ತಂಬಾಕು SR-1 ಮೊಳಕೆ ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 5a).ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, 48 ಬೀಜಗಳಲ್ಲಿ 40 ಬೀಜಗಳು 200 μM KAND 11 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದವು, ಆದರೆ ಎಲ್ಲಾ 48 ಬೀಜಗಳು ಅಣಕು-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುತ್ತವೆ, ಇದು KAND ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (p< 0.05;ಚಿ ಪರೀಕ್ಷೆ -ಚದರ) ತಂಬಾಕಿನ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ 5 ಬಿ).ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವ KAND 11 ರ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೋಲುತ್ತದೆ (Fig. 5c).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು KAND 11 ವಿವಿಧ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ನಾವು ನಂತರ ಇತರ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಕರಡಿ ಮೊನೊಮೈಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಸಂಭವನೀಯ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಮಾನವನ HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು Escherichia coli ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5α, ಕ್ರಮವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಾಣಿ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿಗಳಾಗಿ.ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಸರಣಿಯಲ್ಲಿ, ನಾವು ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 1, ಕೂಮಾಮೊನಾಮಿಡಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6 ಮತ್ತು KAND 11 100 μM (Fig. 5d,e) ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ HeLa ಅಥವಾ E. ಕೊಲಿ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಅಲ್ಲದ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ KAND 11 ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ.(a) ಎರಡು ವಾರದ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ SR-1 ತಂಬಾಕು ಸಸಿಗಳನ್ನು 25 μM KAND 11 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಲಂಬವಾಗಿ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿರುವ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. (b) ಎರಡು ವಾರದ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ SR-1 ತಂಬಾಕು ಸಸಿಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಲಾಗಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ 200 μM KAND 11. (c) KAND 11 ರ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ B5 ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಎರಡು-ವಾರ-ಹಳೆಯ ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ Tak-1 ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಮೊಗ್ಗುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು. ಕೆಂಪು ಬಾಣಗಳು ಎರಡು ವಾರಗಳ ಕಾವು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಯುವುದನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಿದ ಬೀಜಕಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ ಅವಧಿ.(ಡಿ) HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.ಸೆಲ್ ಕೌಂಟಿಂಗ್ ಕಿಟ್ 8 (ಡೊಜಿಂಡೋ) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ನಿಗದಿತ ಸಮಯದ ಮಧ್ಯಂತರದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 5 μg/ml ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸಿನ್ D (ಆಕ್ಟ್ D) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು, ಇದು RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಮೂರು ಬಾರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.(ಇ) E. ಕೋಲಿ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.OD600 ಅನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ E. ಕೊಲಿ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 50 μg/ml ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ (Amp) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಗೋಡೆಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಮೂರು ಬಾರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಯುರಾಮಿಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಮಧ್ಯಮ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮಗಳೊಂದಿಗೆ ಅರ್ಬೆನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಮರುವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದೆವು.ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ.ಚಿತ್ರಗಳು 2b, 6a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು (200 μM) ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಮೊಳಕೆ ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಎಡ-ಬಾಗಿದ ಬೇರುಗಳನ್ನು (θ = - 23.7 ± 6.1) ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಮೊಳಕೆ, ಮೊಳಕೆ ಬಹುತೇಕ ನೇರ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ (θ = - 3.8 ± 7.1).ಈ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಓರೆಯಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ 14,18.ಈ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಔಷಧಗಳು ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ನಮ್ಮ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಬೇರಿನ ಓರೆಯಾಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು (ಚಿತ್ರಗಳು. 2b, 6a).ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿದ್ದೇವೆ, ಕೆಲವು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ, ಓರೆಯಾದ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ.ಸಂಯುಕ್ತಗಳು 8, 9, ಮತ್ತು 15 ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ 75 μM, 50 μM ಮತ್ತು 40 μM ನಲ್ಲಿ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿದವು, ಈ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 2b, 6a).ನಾವು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ (15 µM) ಅತ್ಯಂತ ಶಕ್ತಿಯುತವಾದ ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನವಾದ KAND 11 ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು KAND 11 ನ ಅನ್ವಯವು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬೇರುಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕು ಅಸಮವಾಗಿದೆ, ಆದರೂ ಅವು ಎಡಕ್ಕೆ ಇಳಿಜಾರಾಗಿವೆ ( ಚಿತ್ರ C3)..ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬುಲ್-ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಔಷಧಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಸಸ್ಯದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಬದಲಿಗೆ ಬೇರಿನ ಓರೆಯಾಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ನಾವು ತರುವಾಯ ರೂಟ್ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸುವುದರ ಮೂಲಕ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ KAND 11 ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ.25 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮೊಳಕೆ ಬೇರುಗಳ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವಿರೋಧಿ β- ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿನ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳು ಕಣ್ಮರೆಯಾಗುವುದನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 6b).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕುಮಾಮೊಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಲು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಈ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ನವೀನ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ಗಳು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಅರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ.(ಎ) ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ರೂಟ್ ಇಳಿಜಾರಿನ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಎರಡು ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಸಹ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ: ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್.ಮೂಲ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಬಳಸುವ ಮಾನದಂಡವನ್ನು ಇನ್ಸೆಟ್ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಶಾಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).n>19. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.(b) ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿ ಹೊರಚರ್ಮದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳು.25 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆಯೇ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಕೋಲ್ ರೂಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು β-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್-ಸಂಯೋಜಿತ ದ್ವಿತೀಯಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm.(ಸಿ) ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ರಚನೆ.ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೊಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರೋಫೇಸ್ ವಲಯಗಳು, ಸ್ಪಿಂಡಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ರಾಗ್ಮೋಪ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳಿಂದ ಎಣಿಸಲಾಗಿದೆ.ಬಾಣಗಳು ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಶಾಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).n>9. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 50 µm.
ಉರ್ಸಾ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, ಅದರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಾದ ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳ ಅನಿಸೊಟ್ರೊಪಿಕ್ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ KAND 11 ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, KAND 11 ಮತ್ತು ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್‌ನ ಸಹ-ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳು ಸಂಯೋಜಿತ ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್-ಪ್ರೇರಿತ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು ಮತ್ತು KAND 11-ಪ್ರೇರಿತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು (Fig. S4).KAND 11 ಗೆ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಅತಿಸೂಕ್ಷ್ಮ ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್ 1-1 (phs1-1) ನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಹ ನಾವು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. phs1-1 ಕ್ಯಾನೊನಿಕಲ್ ಅಲ್ಲದ ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಕೈನೇಸ್ ಪಾಯಿಂಟ್ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್ 9,20 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದಾಗ ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ.phs1-1 KAND 11 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ರೂಪಾಂತರಿತ ಸಸಿಗಳು ಡಿಸ್ಪಿರಮಿಡ್ (ಅಂಜೂರ. S5) ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದಂತೆಯೇ ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.
ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರೊಫೇಸ್ ವಲಯಗಳು, ಸ್ಪಿಂಡಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ರಾಗ್‌ಮೋಪ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಂತಹ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. CDKB2; 1p:: CDKB2; 1-GUS ಗಾಗಿ ವೀಕ್ಷಣೆಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಗಮನಾರ್ಹ ಇಳಿಕೆ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (Fig. .6c).
ಉಪಕೋಶೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್‌ನಲ್ಲಿ KAND 11 ನ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು, ನಾವು ತಂಬಾಕು BY-2 ಅಮಾನತು ಕೋಶಗಳನ್ನು KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ KAND 11 ರ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ನಾವು ಮೊದಲು KAND 11 ಅನ್ನು BY-2 ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು TagRFP-TUA6 ಅನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ.1 ಗಂಟೆಗೆ 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ 0.94 ± 0.74% ಅಥವಾ 0.23 ± 0.28% ಕ್ಕೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಆದರೆ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ± 4.1.3 % (ಚಿತ್ರ 7a).KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಡಿಪೋಲಿಮರೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 6b) ಎಂಬ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ವೀಕ್ಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ.KAND 11 ರ ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ GFP-ABD-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ನಾವು BY-2 ಲೈನ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.1 ಗಂ 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಮೆಂಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 1.20 ± 0.62% ಅಥವಾ 0.61 ± 0.26% ಗೆ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಿತು, ಆದರೆ DMSO-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ± 1.6. 1.6.7b).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಪ್ರೊಪಿಜಮೈಡ್‌ನ ಪರಿಣಾಮಗಳೊಂದಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಇದು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಟ್ರನ್‌ಕುಲಿನ್ B, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರದ ಆಕ್ಟಿನ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸರ್ (SI ಚಿತ್ರ S6).ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ 1, ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ ಆಮ್ಲ 6, ಅಥವಾ KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (SI ಚಿತ್ರ S7).ಹೀಗಾಗಿ, KAND 11 ರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ತಿಳಿದಿರುವ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳ ನಮ್ಮ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಅವಲೋಕನವು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನ ಆಕ್ರಮಣವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು ಮತ್ತು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮಾಣವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಲಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND ನೊಂದಿಗೆ 90 ನಿಮಿಷಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಕ್ರಮವಾಗಿ 43.7% ಅಥವಾ 80.1% ಕ್ಕೆ ಏರಿತು (Fig. 7c).ಒಟ್ಟಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಡೇಟಾವು ಕಾದಂಬರಿ ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನ KAND 11 ಒಂದು ಸಸ್ಯ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದ್ದು, ಹಿಂದೆ ತಿಳಿದಿಲ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.
KAND ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು, ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ ಮತ್ತು ತಂಬಾಕು BY-2 ಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.(a) TagRFP-TUA6 ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ BY-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ದೃಶ್ಯೀಕರಣ.KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 25 ಸ್ವತಂತ್ರ ಕೋಶಗಳ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟುಕಿ ಎಚ್‌ಎಸ್‌ಡಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm.(b) BY-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ GFP-ABD2 ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 25 ಸ್ವತಂತ್ರ ಕೋಶಗಳ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್ಗಳಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟುಕಿ ಎಚ್‌ಎಸ್‌ಡಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05).ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm.(ಸಿ) ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಿಂದ ಸತ್ತ BY-2 ಕೋಶಗಳ ವೀಕ್ಷಣೆ.KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬ್ರೈಟ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.n=3.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm.
ಹೊಸ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಅನ್ವೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯವು ಔಷಧ ಮತ್ತು ಕೃಷಿ ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾನವ ಜೀವನದ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಗತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.ನೈಸರ್ಗಿಕ ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳಿಂದ ಉಪಯುಕ್ತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಐತಿಹಾಸಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್, ಐವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಬ್ಲೋಮೈಸಿನ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸೀಸದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಾದ ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಂತಹ ವಿವಿಧ ದ್ವಿತೀಯಕ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದಿಂದಾಗಿ ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಆಂಟಿಪರಾಸಿಟಿಕ್ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳಾಗಿ ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೀಟ್‌ಗಳು ಉಪಯುಕ್ತವೆಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ21,22.ಅಂತೆಯೇ, ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೆಟ್‌ಗಳಿಂದ ವಿವಿಧ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಈಗಾಗಲೇ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ 1,23 ಬಳಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೆಟ್ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ತಂತ್ರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ ಎಂಬ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಅರ್ಬೆನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರವಾಗಿದೆ.ಇದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ರೂಟ್ ಕರ್ಲಿಂಗ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು, ಮಧ್ಯಮದಿಂದ ಬಲವಾದ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಸಸ್ಯ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬುಲ್‌ಗಳನ್ನು ಹಾನಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರಬಹುದು, ಏಕೆಂದರೆ KAND 11 ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ರಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುವ ನಿಯಂತ್ರಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ..
ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿವರವಾದ ಗುಣಲಕ್ಷಣವು ಅರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ನೇರವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆಯೇ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸ್ ಮಾಡುತ್ತವೆಯೇ ಅಥವಾ ಅವುಗಳ ಕ್ರಿಯೆಯು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಅಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕಡಿಮೆ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಮುಂದಿನ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ನೇರ ಗುರಿಯಾಗದ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಸ್ಥಳ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಸಂಭವನೀಯ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ನಮ್ಮ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾ, ತಂಬಾಕು ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ನಂತಹ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವಿಶಿಷ್ಟ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು, ಆದರೆ E. ಕೊಲಿ ಅಥವಾ ಹೆಲಾ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ.ತೆರೆದ ಕೃಷಿ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರೆ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸ್ವಲ್ಪ ಅಥವಾ ವಿಷತ್ವವು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪ್ರಯೋಜನವಾಗಿದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಯೂಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ರಚನೆಗಳಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಆಯ್ದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಾಗಿದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಪ್ರೋಪಿಜಮೈಡ್, ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್‌ಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವ ಮತ್ತು ಪಾಲಿಮರೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬುಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್, ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ವಿಷತ್ವದಿಂದಾಗಿ ಸಸ್ಯನಾಶಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ24.ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್‌ಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಸಂಬಂಧಿತ ಬೆಂಜಮೈಡ್‌ಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಗುರಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.ಸಸ್ಯದ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಜೊತೆಗೆ, RH-4032 ಅಥವಾ ಬೆಂಝಾಕ್ಸಮೈಡ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಓಮೈಸೆಟ್‌ಗಳ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಲಿಲಾಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಅದರ ಕಡಿಮೆ ಫೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿ25,26,27 ಕಾರಣ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹೊಸದಾಗಿ ಪತ್ತೆಯಾದ ಕರಡಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಸಸ್ಯಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಆಯ್ದ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಮತ್ತಷ್ಟು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳು ಅವುಗಳ ಗುರಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು, ರೋಗಕಾರಕ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳು ಅಥವಾ ಓಮೈಸೆಟ್‌ಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಸಮರ್ಥವಾಗಿ ಒದಗಿಸಬಹುದು.
ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಸಂಶೋಧನಾ ಸಾಧನಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲು ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿವೆ.ಸಸ್ಯ ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಂಘಟನೆಯ ಸಂಕೀರ್ಣ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಸ್ಯಗಳು ವಿಕಸನಗೊಳಿಸಿವೆ ಎಂದು ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಅಣುಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಶೋಧನೆಯು ಇನ್ನೂ ನಡೆಯುತ್ತಿದೆ3,4,28.ಸಸ್ಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ನ ನಮ್ಮ ಪ್ರಸ್ತುತ ತಿಳುವಳಿಕೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಂಘಟನೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ವಿವರಿಸುವುದಿಲ್ಲ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಡಿಸೊಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಎರಡೂ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು, ಡಿಸ್ಪೈರಮೈಡ್ ತೀವ್ರ ಬೇರಿನ ಅಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಒರಿಜಲಿನ್ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸೌಮ್ಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಇದಲ್ಲದೆ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬುಲ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್‌ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಬೇರುಗಳಲ್ಲಿ ಡೆಕ್ಸ್ಟ್ರೊರೊಟೇಶನ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪ್ಯಾಕ್ಲಿಟಾಕ್ಸೆಲ್ ಸಹ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಗುರುತಿಸುವುದು ಸಸ್ಯದ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೊಸ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬೇಕು.ಅಂತೆಯೇ, ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್‌ನಂತಹ ವಿಕೃತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾದ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳ ಭವಿಷ್ಯದ ಹೋಲಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಅಥವಾ ಕುಮಾಮೊಟೊರಿಕ್ ಆಮ್ಲದಂತಹ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳು ವಿಕೃತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯು ಹೇಗೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಸುಳಿವುಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ರಕ್ಷಣಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಮರುಜೋಡಣೆಗಳು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಮತ್ತೊಂದು ಸಾಧ್ಯತೆಯಾಗಿದೆ.ರೋಗಕಾರಕದ ಸೋಂಕು ಅಥವಾ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಎಲಿಸಿಟರ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವುದು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ನಾಶಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವು 29.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಓಮಿಸೆಟ್-ಪಡೆದ ಕ್ರಿಪ್ಟೋಕ್ಸಾಂಥಿನ್ ತಂಬಾಕು ಕೋಶಗಳ ಸಾವಿನ ಮೊದಲು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಇದು KAND ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ30,31.ರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಡುವಿನ ಸಾಮ್ಯತೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಲು ನಮಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಆದಾಗ್ಯೂ ಕ್ರಿಪ್ಟೋಕ್ಸಾಂಥಿನ್‌ಗಿಂತ ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಬಲವಾದ ಪರಿಣಾಮವು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಅಡ್ಡಿಯು ಸ್ವಯಂಪ್ರೇರಿತ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಯಾವಾಗಲೂ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಅಡಚಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಇರುವುದಿಲ್ಲ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಂತೆ ರೋಗಕಾರಕ ಅಥವಾ ಎಲಿಸಿಟರ್ ವಿಕೃತ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನೋಡಬೇಕಾಗಿದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಜ್ಞಾನವು ಗಮನಹರಿಸಬೇಕಾದ ಆಕರ್ಷಕ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗಿದೆ.ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಕಡಿಮೆ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ, ಹಾಗೆಯೇ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಶ್ರೇಣಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ, ಅವರು ಅಜ್ಞಾತ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಲು ಅವಕಾಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು.
ಒಟ್ಟಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯವು ಸಸ್ಯ ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಸಂಕೀರ್ಣ ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಪ್ರಬಲ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಮರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಸಂಯುಕ್ತ ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬುಲ್ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಈ ಇತರ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಅವಕಾಶವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ಅರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ರಾಸಾಯನಿಕ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಸಸ್ಯ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ನಿಯಂತ್ರಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ನಮಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
2% (w/v) ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸ್, 2% (w/v) ಎಸೆನ್ಸ್ ಪೇಸ್ಟ್, 1% (w/v) ಬ್ಯಾಕ್ಟೊ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ 110 mL ಬೀಜ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 500 mL ಅಸ್ತವ್ಯಸ್ತವಾಗಿರುವ ಎರ್ಲೆನ್‌ಮೇಯರ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ S. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಅನ್ನು ಇನಾಕ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡಿ .-soyton (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, Inc.), 0.5% (w/v) ಕಾರ್ನ್ ಸಾರ (KOGOSTCH ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಜಪಾನ್), 0.2% (w/v) (NH4) 2SO4 ಮತ್ತು 0.2% CaCO3 ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿನಲ್ಲಿ.(ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಕ್ಕೆ ಮೊದಲು pH 7.4).ಬೀಜ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ರೋಟರಿ ಶೇಕರ್ (180 rpm) ನಲ್ಲಿ 27 ° C ನಲ್ಲಿ 2 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಘನ ಸ್ಥಿತಿಯ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಉತ್ಪಾದನಾ ಕೃಷಿ.ಬೀಜ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು (7 ಮಿಲಿ) 500 ಮಿಲಿ K-1 ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ 40 ಗ್ರಾಂ ಉತ್ಪಾದನಾ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 15 ಗ್ರಾಂ ಒತ್ತಿದ ಬಾರ್ಲಿ (MUSO Co., ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಜಪಾನ್) ಮತ್ತು 25 ಗ್ರಾಂ ಡೀಯಾನೈಸ್ಡ್ ನೀರನ್ನು (pH ಸರಿಹೊಂದಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ. ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಮೊದಲು).)14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ 30 ° C ನಲ್ಲಿ ಹುದುಗುವಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ವಸ್ತುವನ್ನು 40 ಮಿಲಿ/ಬಾಟಲ್ EtOH ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ (1500 ಗ್ರಾಂ, 4 ° C, 10 ನಿಮಿಷ).10% MeOH/EtOAc ಮಿಶ್ರಣದಿಂದ ಕಲ್ಚರ್ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ (60 ಮಿಲಿ) ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ.ಸಾವಯವ ಪದರವು ಶೇಷವನ್ನು (59.5 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಪಡೆಯಲು ಕಡಿಮೆ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಆವಿಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತದ ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID) ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಎಲುಷನ್ (0-10 ನಿಮಿಷಗಳು: 90%) ನೊಂದಿಗೆ HPLC ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು. 10 mm × ಉದ್ದ 250 mm) H2O/CH3CN, 10-35 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O/CH3CN ನಿಂದ 70% H2O/CH3CN (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್), 35-45 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O/EtOH, 45-155 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O /EtOH ನಿಂದ 100% EtOH (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್), 155-200 ನಿಮಿಷ: 100% EtOH) 1.5 ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷದ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ, ಕೂಮಾಮೊನಮೈಡ್ (1, 36.0 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಬಿಳಿ ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ಪುಡಿಯಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.
ಕುಮಾಮೊಟೊಮೈಡ್ (1);1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t , J = 3.8 Hz, 1H).), 4.08 (s, 3H);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3;ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಮೌಲ್ಯ: 141.0659, ಅಳತೆ ಮೌಲ್ಯ: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 15973 cm, 15973.
ಕೊಲಂಬಿಯಾ ಬೀಜಗಳನ್ನು (Col-0) ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಜೈವಿಕ ಸಂಪನ್ಮೂಲ ಕೇಂದ್ರದಿಂದ (ABRC) ಸಂಶೋಧನಾ ಬಳಕೆಗೆ ಅನುಮತಿಯೊಂದಿಗೆ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.Col-0 ಬೀಜಗಳನ್ನು ನಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಚಾರ ಮತ್ತು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಸಸ್ಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅರ್ಧ-ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 2% ಸುಕ್ರೋಸ್ (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್), 0.05% (w/v) 2-(4-ಮಾರ್ಫೊಲಿನೊ) ಎಥೆನೆಸಲ್ಫೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ (MES) (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ಒಳಗೊಂಡಿತ್ತು. )) ಮತ್ತು 1.5% ಅಗರ್ (ಫುಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್), pH 5.7, 23 °C ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರ ಬೆಳಕು.phs1-1 ರೂಪಾಂತರಿತ ಬೀಜಗಳನ್ನು T. ಹಶಿಮೊಟೊ (ನಾರಾ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಆಫ್ ಸೈನ್ಸ್ ಅಂಡ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಒದಗಿಸಿದ್ದಾರೆ.
SR-1 ತಳಿಯ ಬೀಜಗಳನ್ನು T. ಹಶಿಮೊಟೊ (ನಾರಾ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಆಫ್ ಸೈನ್ಸ್ ಅಂಡ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಒದಗಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ತಂಬಾಕು ಸಸ್ಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ತಂಬಾಕು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಬರಡಾದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಮೂರು ರಾತ್ರಿ ನೆನೆಸಿ, ನಂತರ 2% ಸುಕ್ರೋಸ್, 0.05% (w/v) MES, ಮತ್ತು 0.8% ಗೆಲ್ಲನ್ ಗಮ್ (ಫುಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಶುದ್ಧ ರಾಸಾಯನಿಕ) ಹೊಂದಿರುವ ಅರ್ಧ-ಶಕ್ತಿಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮುರಶಿಗೆ.ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಧ್ಯಮ) pH 5.7 ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ನಿರಂತರ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ 23 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಟಾಕ್-1 ಅನ್ನು T. ಕೊಹ್ಚಿ (ಕ್ಯೋಟೋ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯ) ಒದಗಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಘಟಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಜೆಮ್ಮಾವನ್ನು ಕ್ರಿಮಿಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 1% ಸುಕ್ರೋಸ್ ಮತ್ತು 0.3% ಗೆಲ್ಲನ್ ಗಮ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ B5 ಮಧ್ಯಮ (ಫುಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ಮೇಲೆ ಲೇಪಿತ ಮತ್ತು ನಿರಂತರ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ 23 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ತಂಬಾಕು BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು (ನಿಕೋಟಿಯಾನಾ ಟ್ಯಾಬಕಮ್ ಎಲ್. ಸಿವಿ. ಬ್ರೈಟ್ ಯೆಲ್ಲೋ 2) ಎಸ್. ಹಸೆಜಾವಾ (ಟೋಕಿಯೊ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯ) ಒದಗಿಸಿದ್ದಾರೆ.BY-2 ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ Linsmeier ಮತ್ತು Skoog ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 95-ಪಟ್ಟು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 2,4-ಡೈಕ್ಲೋರೊಫೆನಾಕ್ಸಿಯಾಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ 32 ನೊಂದಿಗೆ ವಾರಕ್ಕೊಮ್ಮೆ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ.ಸೆಲ್ ಅಮಾನತು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ 27 ° C ನಲ್ಲಿ 130 rpm ನಲ್ಲಿ ರೋಟರಿ ಶೇಕರ್‌ನಲ್ಲಿ ಮಿಶ್ರಣವಾಗಿದೆ.ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದ 10 ಪಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣದೊಂದಿಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ಅದೇ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮರುಹೊಂದಿಸಿ.BY-2 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಮಾರ್ಕರ್ TagRFP-TUA6 ಅಥವಾ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಮೆಂಟ್ ಮಾರ್ಕರ್ GFP-ABD2 ಅನ್ನು ಹೂಕೋಸು ಮೊಸಾಯಿಕ್ ವೈರಸ್ 35S ಪ್ರವರ್ತಕ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ33,34,35.ಈ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೂಲ BY-2 ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗೆ ಬಳಸುವ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು.
HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು Dulbecco ನ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಈಗಲ್ಸ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (DMEM) (ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) 10% ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್, 1.2 U/ml ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್, ಮತ್ತು 1.2 μg/ml ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್ ಜೊತೆಗೆ 37 ° C ಇಂಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 5% CO.
ಈ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾದ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಜಪಾನಿನ ಜೈವಿಕ ಸುರಕ್ಷತೆ ನಿಯಮಗಳು ಮತ್ತು ಮಾರ್ಗಸೂಚಿಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಡೈಮಿಥೈಲ್ ಸಲ್ಫಾಕ್ಸೈಡ್ (DMSO; ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ನಲ್ಲಿ ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರಗಳಾಗಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಮತ್ತು ತಂಬಾಕು ಅಥವಾ ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ಗಾಗಿ ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ B5 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 10 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬಿತ್ತಲಾಗಿದೆ.ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರೀಕರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೇರುಗಳ ಉದ್ದವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 48 ಬೀಜಗಳನ್ನು 200 μM ಸಂಯುಕ್ತ ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬಿತ್ತಲಾಗಿದೆ.ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ 7 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಡಾಗ್).ತಂಬಾಕು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 24 ಬೀಜಗಳನ್ನು 200 μM KAND ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬಿತ್ತಲಾಗಿದೆ.ತಂಬಾಕು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 14 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ 9 ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಕೆಎಎನ್‌ಡಿ ಅಥವಾ ಡಿಎಂಎಸ್‌ಒನ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಲೇಪಿತಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟೆಮ್ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು 5 mg/ml ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಿದ ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ.TCS SPE ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಲೈಕಾ ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ PI ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಮಲಾಮಿ ಮತ್ತು ಬೆನ್ಫೀ36 ವಿವರಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ β-ಗ್ಲುಕುರೊನಿಡೇಸ್ (GUS) ನೊಂದಿಗೆ ಬೇರುಗಳ ಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 90% ಅಸಿಟೋನ್‌ನಲ್ಲಿ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic ಆಮ್ಲದೊಂದಿಗೆ GUS ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೀಕರಿಸಿದ ಕ್ಲೋರಾಲ್ಡಿಹೈಡ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.(8 ಗ್ರಾಂ ಕ್ಲೋರಲ್ ಹೈಡ್ರೇಟ್, 2 ಮಿಲಿ ನೀರು ಮತ್ತು 1 ಮಿಲಿ ಗ್ಲಿಸರಾಲ್) ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಯೋ ಇಮೇಜರ್ M1 ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು (ಕಾರ್ಲ್ ಝೈಸ್) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಂಟರ್‌ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಲಂಬವಾಗಿ ಇರಿಸಲಾದ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7-ದಿನದ ಸಸಿಗಳ ಮೇಲೆ ರೂಟ್ ಕೋನಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹಂತ 6 ರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಗುರುತ್ವಾಕರ್ಷಣೆಯ ವೆಕ್ಟರ್‌ನ ದಿಕ್ಕಿನಿಂದ ಬೇರಿನ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ.
ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ 37 ಗೆ ಸಣ್ಣ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ಗಳ ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆಂಟಿ-β-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ (KMX-1, ಮರ್ಕ್ ಮಿಲಿಪೋರ್: MAB3408) ಮತ್ತು ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ 488-ಸಂಯೋಜಿತ ಆಂಟಿ-ಮೌಸ್ IgG (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್: A32723) ಅನ್ನು 1:1000 ಮತ್ತು 1:100 ಡೈಲ್ಯೂಷನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಕ್ರಮವಾಗಿ.ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು TCS SPE ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಲೈಕಾ ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಬಳಸಿ ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.Z-ಸ್ಟಾಕ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಗರಿಷ್ಠ ತೀವ್ರತೆಯ ಪ್ರಕ್ಷೇಪಗಳನ್ನು ರಚಿಸಿ.
ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಸೆಲ್ ಕೌಂಟಿಂಗ್ ಕಿಟ್ 8 (ಡೊಜಿಂಡೋ) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು HeLa ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
E. coli DH5α ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು 600 nm (OD600) ನಲ್ಲಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
CSU-X1 ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಸಾಧನ (ಯೊಕೊಗಾವಾ) ಮತ್ತು sCMOS ಕ್ಯಾಮೆರಾ (ಝೈಲಾ, ಆಂಡರ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಹೊಂದಿರುವ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೆನಿಕ್ BY-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ImageJ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲಿನ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ38,39.
BY-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಮರಣವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 0.05% ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದೊಂದಿಗೆ ಸೆಲ್ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು.ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಆಯ್ದ ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವು ಅಖಂಡ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯಿಂದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವುದನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.ಬ್ರೈಟ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (BX53, ಒಲಿಂಪಸ್) ಬಳಸಿ ಬಣ್ಣದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.
HeLa ಕೋಶಗಳನ್ನು DMEM ನಲ್ಲಿ 10% FBS ನೊಂದಿಗೆ 37 ° C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಕೋಶಗಳನ್ನು 100 μM KAND 11, ಕುಮಾಮೊನಾಮಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6, ಕುಮಾಮೊನಮೈಡ್ 1, 100 ng/ml ಕೋಲ್ಸೆಮಿಡ್ (ಗಿಬ್ಕೊ), ಅಥವಾ 100 ng/ml ನೊಕೊಡ್‌ಮೇಜ್ (ಸಿಗ್ಮಾ) ನೊಂದಿಗೆ 6 ಗಂಟೆಗಳವರೆಗೆ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಕೋಶಗಳನ್ನು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ MetOH ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಅಸಿಟೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸ್ಥಿರ ಕೋಶಗಳನ್ನು β-tubulin ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯ (1D4A4, ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಟೆಕ್: 66240-1) 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 0.5% BSA/PBS ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, TBST ಯೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ ಮೇಕೆ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.488 1 ಗಂಟೆ.– ಮೌಸ್ IgG (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್: A11001) ಮತ್ತು 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.5% BSA/PBS ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.TBST ಯೊಂದಿಗೆ ಮೂರು ಬಾರಿ ತೊಳೆದ ನಂತರ, ನಿಕಾನ್ ಎಕ್ಲಿಪ್ಸ್ Ti-E ವಿಲೋಮ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.ಮೆಟಾಮಾರ್ಫ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲರ್ ಡಿವೈಸಸ್) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ತಂಪಾಗುವ ಹಮಾಮಟ್ಸು ORCA-R2 CCD ಕ್ಯಾಮೆರಾದೊಂದಿಗೆ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ.