ಸಸ್ಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮನಾಲಿಕೆಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹೊಸ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಾಗಿ ಉರ್ಸಾ ಮೊನೊಮೈಡ್‌ಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ, ಗುಣಲಕ್ಷಣ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಸುಧಾರಣೆ.

Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು. ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್‌ನ ಆವೃತ್ತಿಯು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ, ನಿಮ್ಮ ಬ್ರೌಸರ್‌ನ ಹೊಸ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ). ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಸ್ಟೈಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತಿದ್ದೇವೆ.
ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ಬಳಕೆಯು ಮಾನವ ಜೀವನವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಕಳೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಕಳೆನಾಶಕಗಳಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಕಳೆನಾಶಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಅಗತ್ಯದಿಂದಾಗಿ, ಹೊಸ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ನಿಂದ ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಎಂಬ ಕಾದಂಬರಿ N-ಆಲ್ಕಾಕ್ಸಿಪೈರೋಲ್ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಮೂಲಕ, urs-monoamic ಆಮ್ಲವು urs-monoamide ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರ ಮತ್ತು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ.ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ನಾವು ವಿವಿಧ ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಅದರಲ್ಲಿ ಉರ್ಬೆನಿಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನ (UDA) ಕೂಡ ಸೇರಿದೆ, ಇದು HeLa ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರದೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಉರ್ಮೊಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಸಸ್ಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮನಾಶಕಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ; ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, KAND ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ; ಈ ಬಹುಮುಖಿ ಪರಿಣಾಮಗಳು ತಿಳಿದಿರುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಕ್ರಿಯೆಯ ಹೊಸ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಹೊಸ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅನ್ವಯಿಕೆಯು ಮಾನವ ಜೀವನದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಒಂದು ಸಾಧನವಾಗಿದೆ. ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳು, ಸಸ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಕೀಟಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಔಷಧ ಮತ್ತು ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಗತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿವೆ. ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಅನೇಕ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳು ಮತ್ತು ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ವಿವಿಧ ರೀತಿಯಕೀಟನಾಶಕಗಳು, ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಈ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕಗಳು ಮತ್ತು ಕಳೆನಾಶಕಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಆಧುನಿಕ ಕೃಷಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಕಳೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕಳೆನಾಶಕಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಈಗಾಗಲೇ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ದ್ಯುತಿಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲ ಚಯಾಪಚಯ, ಕೋಶ ಗೋಡೆಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಮೈಟೋಸಿಸ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಫೈಟೊಹಾರ್ಮೋನ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಂತಹ ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿನ ಹಲವಾರು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಕಳೆನಾಶಕಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುರಿಗಳೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮೈಟೊಟಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಮೂಲಕ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಕಳೆನಾಶಕಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ವರ್ಗವಾಗಿದೆ.
ಸೂಕ್ಷ್ಮನಾಲಿಕೆಗಳು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ಘಟಕಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ. ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಹೆಟೆರೊಡೈಮರ್ α-ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಮತ್ತು β-ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ರೇಖೀಯ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಪ್ರೊಟೊಫಿಲಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, 13 ಪ್ರೊಟೊಫಿಲಮೆಂಟ್‌ಗಳು ಸಿಲಿಂಡರಾಕಾರದ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ. ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ, ಕೋಶ ವಿಭಜನೆ ಮತ್ತು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶ ಸಾಗಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವುದು ಸೇರಿದಂತೆ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮನಾಲಿಕೆಗಳು ಬಹು ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳು ಇಂಟರ್‌ಫೇಸ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯ ಕೆಳಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮನಾಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಈ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೂಲಕ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಮೈಕ್ರೋಫೈಬ್ರಿಲ್‌ಗಳ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ. ಬೇರಿನ ತುದಿಯ ತ್ವರಿತ ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿರುವ ಮೂಲ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಪಾರ್ಶ್ವವಾಗಿ ನೆಲೆಗೊಂಡಿವೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಮೈಕ್ರೋಫೈಬರ್‌ಗಳು ಈ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕೋಶ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅನಿಸೊಟ್ರೊಪಿಕ್ ಕೋಶ ಉದ್ದವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವು ಸಸ್ಯ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ. ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಅಮೈನೊ ಆಮ್ಲ ಪರ್ಯಾಯಗಳು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಶ್ರೇಣಿಗಳ ಓರೆತನ ಮತ್ತು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ 6,7 ರಲ್ಲಿ ಎಡ ಅಥವಾ ಬಲ-ಬದಿಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ. ಅದೇ ರೀತಿ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ವಿರೂಪಗೊಳ್ಳಬಹುದು8,9,10,11,12,13. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಪ್ರಿಟಿಲಾಕ್ಲೋರ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್‌ನಂತಹ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಕಳೆನಾಶಕಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಎಡ-ಬದಿಯ ಓರೆಯಾದ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ14. ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯದ ನಿಖರವಾದ ನಿಯಂತ್ರಣವು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಈ ಔಷಧಿಗಳು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಹಾಗೂ ಕೃಷಿ ಮತ್ತು ಔಷಧಕ್ಕೆ ಗಮನಾರ್ಹ ಕೊಡುಗೆಗಳನ್ನು ನೀಡಿವೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಒರಿಜಲಿನ್, ಡೈನೈಟ್ರೋಅನಿಲಿನ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು, ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್, ಬೆಂಜಮೈಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಸಾದೃಶ್ಯಗಳು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಆ ಮೂಲಕ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅವುಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಸಸ್ಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಣಿ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳು ಎರಡೂ ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳಿಗೆ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಆಗಿರುತ್ತವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಕಳೆನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಅವುಗಳ ಗುರುತಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಉಪಯುಕ್ತತೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ಸೀಮಿತ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಆಂಟಿಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ಎಂಬುದು ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ಕುಟುಂಬದ ಒಂದು ಕುಲವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಏರೋಬಿಕ್, ಗ್ರಾಂ-ಪಾಸಿಟಿವ್, ಫಿಲಾಮೆಂಟಸ್ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ದ್ವಿತೀಯಕ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕೆ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಹೆಸರುವಾಸಿಯಾಗಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದು ಹೊಸ ಜೈವಿಕವಾಗಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಮೂಲಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಎಂಬ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ, ಇದನ್ನು ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಸ್ ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಮತ್ತು S. ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ ISP 5486 ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ. ರೋಹಿತ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಪೂರ್ಣ ರೋಹಿತ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್‌ನ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ N-ಆಲ್ಕಾಕ್ಸಿಪೈರೋಲ್ ಅಸ್ಥಿಪಂಜರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ. ಉರ್ಸ್ಮೋನೊಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರವಾದ ಉರ್ಸ್ಮೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಜನಪ್ರಿಯ ಮಾದರಿ ಸಸ್ಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧದ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಉರ್ಸ್ಮೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ C9 ಹೊಂದಿರುವ ಸಂಯುಕ್ತವು ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಇದನ್ನು ಉರ್ಸ್ಮೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ನಾನಿಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನ (KAND) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಹೊಸದಾಗಿ ಕಂಡುಹಿಡಿದ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ತಂಬಾಕು ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೂ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಿತು ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಅಥವಾ HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಆಗಿರಲಿಲ್ಲ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಕೆಲವು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ವಿರೂಪಗೊಂಡ ಬೇರಿನ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ, ಈ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಕಲ್ಪನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಆಗಿ ಅಥವಾ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ನಮ್ಮ ಅವಲೋಕನಗಳು KAND ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೀಕರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕುಮಾಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಮೈಕ್ರೋಫಿಲಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ನಾವು ಹೊಸ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ, ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ನಾಶವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.
ಟೋಕಿಯೊದ ಶಿನಗಾವಾ-ಕುದಲ್ಲಿ ಮಣ್ಣಿನಿಂದ MK493-CF1 ತಳಿಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು. MK493-CF1 ತಳಿಯು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಕವಲೊಡೆದ ಸ್ಟ್ರೋಮಲ್ ಮೈಸಿಲಿಯಮ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಿತು. 16S ರೈಬೋಸೋಮಲ್ RNA ಜೀನ್‌ನ (1422 bp) ಭಾಗಶಃ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ತಳಿಯು S. ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ವಿಶಿಷ್ಟ ತಳಿ, 99.93%) ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಈ ತಳಿಯು S. ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ ಪ್ರಕಾರದ ತಳಿಗೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಆದ್ದರಿಂದ, ನಾವು ಈ ತಳಿಯನ್ನು ತಾತ್ಕಾಲಿಕವಾಗಿ S. ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಿದ್ದೇವೆ. S. ವೆರ್ರೆನ್ಸಿಸ್ ISP 5486T ಸಹ ಅದೇ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳಿಂದ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವ ಬಗ್ಗೆ ಕಡಿಮೆ ಆರಂಭಿಕ ಸಂಶೋಧನೆ ಇದ್ದ ಕಾರಣ, ಹೆಚ್ಚಿನ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಯಿತು. ಬಾರ್ಲಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 30°C ನಲ್ಲಿ ಘನ-ಸ್ಥಿತಿಯ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ 14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ S. werraensis MK493-CF1 ಅನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದ ನಂತರ, ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 50% EtOH ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. 59.5 ಮಿಗ್ರಾಂ ಕಚ್ಚಾ ಸಾರವನ್ನು ಪಡೆಯಲು 60 ಮಿಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು. N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, coumamonamide ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಲಾಗಿದೆ, 36.0 mg) ನೀಡಲು ಕಚ್ಚಾ ಸಾರವನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತದ HPLC ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು. 1 ರ ಒಟ್ಟು ಪ್ರಮಾಣವು ಕಚ್ಚಾ ಸಾರದ ಸರಿಸುಮಾರು 60% ಆಗಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ನಾವು ಕುಮಾಮೊಟೊಮೈಡ್ 1 ರ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ವಿವರವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 1 ಬಿಳಿ ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ಪುಡಿಯಾಗಿದ್ದು, ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (HRESIMS) C6H8N2O2 ಅನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 1). ಈ ಸಂಯುಕ್ತದ C2-ಬದಲಿ ಪೈರೋಲ್ ತುಣುಕನ್ನು δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, 1H NMR ವರ್ಣಪಟಲದಲ್ಲಿ δH: 4.5 Hz, H-5) ಮತ್ತು δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6) ನಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು 13C NMR ವರ್ಣಪಟಲವು ನಾಲ್ಕು sp2 ಕಾರ್ಬನ್ ಪರಮಾಣುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. C2 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ಅಮೈಡ್ ಗುಂಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು δC 161.1 ನಲ್ಲಿ C-3 ಪ್ರೋಟಾನ್‌ನಿಂದ ಅಮೈಡ್ ಕಾರ್ಬೊನಿಲ್ ಕಾರ್ಬನ್‌ಗೆ HMBC ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧದಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, δH 4.10 (3H, S) ಮತ್ತು δC 68.3 ನಲ್ಲಿ 1 H ಮತ್ತು 13 C NMR ಶಿಖರಗಳು ಅಣುವಿನಲ್ಲಿ N-ಮೆಥಾಕ್ಸಿ ಗುಂಪುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ವರ್ಧಿತ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ವರ್ಣಪಟಲ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಓವರ್‌ಹೌಸರ್ ಸಂಕ್ಷೇಪಣ (NOEDF) ನಂತಹ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೆಥಾಕ್ಸಿ ಗುಂಪಿನ ಸರಿಯಾದ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಇನ್ನೂ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲವಾದರೂ, N-ಮೆಥಾಕ್ಸಿ-1H-ಪೈರೋಲ್-2-ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಮೈಡ್ ಮೊದಲ ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಸಂಯುಕ್ತವಾಯಿತು.
1 ರ ಸರಿಯಾದ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ಒಟ್ಟು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 2a). ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ 2-ಅಮಿನೊಪಿರಿಡಿನ್ 2 ಅನ್ನು m-CPBA ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸುವುದರಿಂದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ ಅನುಗುಣವಾದ N-ಆಕ್ಸೈಡ್ 3 ದೊರೆಯಿತು. 2 ರ 2-ಅಮಿನೊಅಜೈಡೀಕರಣದ ನಂತರ, ಅಬ್ರಮೊವಿಚ್ ವಿವರಿಸಿದ ಸೈಕ್ಲೋಕಂಡೆನ್ಸೇಶನ್ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಬೆಂಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ 90 ° C ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂನಲ್ಲಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ 1-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿ-1H-ಪೈರೋಲ್-2-ಕಾರ್ಬೊನಿಟ್ರೈಲ್ 5 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು. ವೇಗ 60% (ಎರಡು ಹಂತಗಳು). 15,16. 4 ರ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಮತ್ತು ಜಲವಿಚ್ಛೇದನೆ ನಂತರ ಉತ್ತಮ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ (70%, ಎರಡು ಹಂತಗಳು) 1-ಮೆಥಾಕ್ಸಿ-1H-ಪೈರೋಲ್-2-ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ("ಕ್ಯುಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ" ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, 6) ನೀಡಿತು. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಜಲೀಯ ಅಮೋನಿಯಾವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಮ್ಲ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಮಧ್ಯಂತರ 6 ಮೂಲಕ ಅಮಿಡೇಶನ್ 98% ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್ 1 ಅನ್ನು ನೀಡಿತು. ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ 1 ರ ಎಲ್ಲಾ ರೋಹಿತದ ದತ್ತಾಂಶವು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ 1 ರಂತೆಯೇ ಇತ್ತು, ಆದ್ದರಿಂದ 1 ರ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು;
ಉರ್ಬೆನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಉರ್ಬೆನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ. (ಎ) ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್‌ನ ಒಟ್ಟು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ. (ಬಿ) ಏಳು ದಿನಗಳ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಕೊಲಂಬಿಯಾ (ಕೋಲ್) ಸಸಿಗಳನ್ನು ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ (ಎಂಎಸ್) ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 6 ಅಥವಾ ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 1 ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.ಮೀ.
ಮೊದಲಿಗೆ, ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕಾಗಿ ನಾವು ಉರ್ಬೆನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಮಧ್ಯಂತರಗಳ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ. ನಾವು MS ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಉರ್ಸೊನಮೈಡ್ 1 ಅಥವಾ ಉರ್ಸೊನಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6 ರ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಈ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಿದ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾ ಸಸಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು 6 ರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು (500 μM) ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ (ಚಿತ್ರ 2b). ಮುಂದೆ, ನಾವು 6 ರ N1 ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಬದಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಿವಿಧ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಮೇಲೆ ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ (ಅನಲಾಗ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪೋಷಕ ಮಾಹಿತಿ (SI) ನಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ). ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಸಸಿಗಳನ್ನು 50 μM ಉರ್ಸೊನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೇರಿನ ಉದ್ದವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ. ಚಿತ್ರಗಳು 3a, b, ಮತ್ತು S1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಕೂಮಾಮೊ ಆಮ್ಲಗಳು N1 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಉದ್ದದ ರೇಖೀಯ ಆಲ್ಕೊಕ್ಸಿ ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು (9, 10, 11, 12, ಮತ್ತು 13) ಅಥವಾ ದೊಡ್ಡ ಆಲ್ಕೊಕ್ಸಿ ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು (15, 16, ಮತ್ತು 17) ಹೊಂದಿವೆ. ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, 200 μM 10, 11, ಅಥವಾ 17 ರ ಅನ್ವಯವು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 3c ಮತ್ತು S2).
ಕುಮಾಮೊಟೊ ಅಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧದ ಅಧ್ಯಯನ. (ಎ) ಸಾದೃಶ್ಯಗಳ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಯೋಜನೆ. (ಬಿ) 50 μM ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7 ದಿನಗಳ ಹಳೆಯ ಸಸಿಗಳ ಬೇರಿನ ಉದ್ದದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ. ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ನಕಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05). n>18. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. nt ಎಂದರೆ "ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ" ಏಕೆಂದರೆ 50% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬೀಜಗಳು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯಲಿಲ್ಲ. (ಸಿ) 200 μM ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಟ್ಟ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಬೀಜಗಳ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣ. ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ನಕಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿ-ಸ್ಕ್ವೇರ್ ಪರೀಕ್ಷೆ). n=96.
ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, C9 ಗಿಂತ ಉದ್ದವಾದ ಆಲ್ಕೈಲ್ ಸೈಡ್ ಸರಪಳಿಗಳ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಇದು ಕುಮಾಮೊಟೊಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಗೆ ಅವುಗಳ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಗಾತ್ರದ ಸೈಡ್ ಸರಪಳಿಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ರಚನೆ-ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಂಬಂಧ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು C9 ಅನ್ನು ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ನಾನಿಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನ (ಇನ್ನು ಮುಂದೆ KAND 11 ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಅತ್ಯಂತ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಸ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದ್ದರಿಂದ, ನಾವು KAND 11 ರ ಹೆಚ್ಚು ವಿವರವಾದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ. 50 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆಯಿತು, ಆದರೆ KAND 11 ನ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು (40, 30, 20, ಅಥವಾ 10 μM) ಡೋಸ್-ಅವಲಂಬಿತ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 4a, b). KAND 11 ಬೇರಿನ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು, ನಾವು ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಬೇರಿನ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಪ್ರದೇಶದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತೇವೆ. 25 μM KAND-11 ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಸಸಿಗಳ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಗಾತ್ರ 151.1 ± 32.5 μm ಆಗಿತ್ತು, ಆದರೆ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಸಸಿಗಳ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಗಾತ್ರ 264.7 ± 30.8 μm ಆಗಿತ್ತು (ಚಿತ್ರ 4c, d), ಇದು KAND-11 ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪುನಃಸ್ಥಾಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಹರಡುವಿಕೆ. ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್. ಇದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೋಶ ವಿಭಜನೆ ಮಾರ್ಕರ್ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ಸಿಗ್ನಲ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು (ಚಿತ್ರ 4e) 17. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು KAND 11 ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ (ಉರ್ಬೆನಿಲಾಕ್ಸಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು) ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ. (ಎ) KAND 11 ರ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7 ದಿನಗಳ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಕೋಲ್ ಸಸಿಗಳು. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.ಮೀ. (ಬಿ) ಬೇರಿನ ಉದ್ದದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ. ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟುಕಿ HSD ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು.< 0.05). n>16. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. (c) 25 μM KAND ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್-ಬಣ್ಣದ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಕೋಲ್ ಬೇರುಗಳ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ 11. ಬಿಳಿ ಆವರಣಗಳು ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm. (d) ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 10 ರಿಂದ 11). ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ (p< 0.05). ಬಾರ್‌ಗಳು ಸರಾಸರಿ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ. (ಇ) CDKB2 ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಂಟರ್‌ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ (DIC) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ; 1pro: CDKB2; 25 µM KAND ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 5 ದಿನಗಳ ಹಳೆಯ ಸಸಿಗಳ ಮೇಲೆ 1-GUS ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಮತ್ತು ಕಲೆ ಹಾಕಿದ.
KAND 11 ರ ಫೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಮತ್ತೊಂದು ದ್ವಿಪಕ್ಷೀಯ ಸಸ್ಯ, ತಂಬಾಕು (ನಿಕೋಟಿಯಾನಾ ಟಬಾಕಮ್) ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಭೂ ಸಸ್ಯ ಮಾದರಿ ಜೀವಿ, ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ (ಮಾರ್ಚಾಂಟಿಯಾ ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಾ) ಬಳಸಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, 25 μM KAND 11 ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ತಂಬಾಕು SR-1 ಮೊಳಕೆಗಳು ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದವು (ಚಿತ್ರ 5a). ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, 48 ಬೀಜಗಳಲ್ಲಿ 40 ಬೀಜಗಳು 200 μM KAND 11 ಹೊಂದಿರುವ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದವು, ಆದರೆ ಎಲ್ಲಾ 48 ಬೀಜಗಳು ಅಣಕು-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದವು, ಇದು KAND ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (p< 0.05; ಚಿ ಟೆಸ್ಟ್ -ಸ್ಕ್ವೇರ್) ತಂಬಾಕಿನ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿತು. (ಚಿತ್ರ 5b). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿದ KAND 11 ರ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 5c). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು KAND 11 ವಿವಿಧ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ನಂತರ ನಾವು ಇತರ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ, ಅಂದರೆ ಮಾನವ HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5α ನಲ್ಲಿ ಕರಡಿ ಮೊನೊಅಮೈಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಸಂಭವನೀಯ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಾಣಿ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿಗಳಾಗಿ ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಸರಣಿಯಲ್ಲಿ, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 1, ಕೂಮಮೊನಮೈಡಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6 ಮತ್ತು KAND 11 100 μM ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ HeLa ಅಥವಾ E. ಕೋಲಿ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 5d,e).
ಅರೇಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಅಲ್ಲದ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ KAND 11 ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ. (ಎ) ಎರಡು ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ SR-1 ತಂಬಾಕು ಸಸಿಗಳನ್ನು 25 μM KAND 11 ಹೊಂದಿರುವ ಲಂಬವಾಗಿ ಇರಿಸಲಾದ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. (ಬಿ) ಎರಡು ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ SR-1 ತಂಬಾಕು ಸಸಿಗಳನ್ನು 200 μM KAND 11 ಹೊಂದಿರುವ ಅಡ್ಡಲಾಗಿ ಇರಿಸಲಾದ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. (ಸಿ) ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ B5 ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ KAND 11 ರ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಬೆಳೆದ ಎರಡು ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ Tak-1 ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಮೊಗ್ಗುಗಳು. ಕೆಂಪು ಬಾಣಗಳು ಎರಡು ವಾರಗಳ ಕಾವು ಕಾಲಾವಧಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಯುವುದನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಿದ ಬೀಜಕಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. (ಡಿ) HeLa ಕೋಶಗಳ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ. ಕೋಶ ಎಣಿಕೆಯ ಕಿಟ್ 8 (ಡೋಜಿಂಡೋ) ಬಳಸಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಸಮಯದ ಮಧ್ಯಂತರದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, HeLa ಕೋಶಗಳನ್ನು 5 μg/ml ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸಿನ್ D (ಆಕ್ಟ್ D) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು, ಇದು RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ತ್ರಿವಳಿಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. (ಇ) ಇ. ಕೋಲಿ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ. ಇ. ಕೋಲಿ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು OD600 ಅಳತೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ 50 μg/ml ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ (Amp) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಕೋಶ ಗೋಡೆಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ತ್ರಿವಳಿಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಯುರಮೈಡ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ಮಧ್ಯಮ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಉರ್ಬೆನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ನಾವು ಮರು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ. ಚಿತ್ರ 2b, 6a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ (200 μM) ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6 ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಮೊಳಕೆಗಳು ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಎಡ-ಬಾಗಿದ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದವು (θ = – 23.7 ± 6.1), ಆದರೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಮೊಳಕೆಗಳಲ್ಲಿ, ಮೊಳಕೆ ಬಹುತೇಕ ನೇರ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿತು (θ = – 3.8 ± 7.1). ಈ ವಿಶಿಷ್ಟ ಓರೆಯಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ. ಈ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಔಷಧಿಗಳಾದ ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ನಮ್ಮ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಬೇರಿನ ಓರೆಯಾಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 2b, 6a). ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಓರೆಯಾದ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಹಲವಾರು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. 8, 9, ಮತ್ತು 15 ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 75 μM, 50 μM ಮತ್ತು 40 μM ನಲ್ಲಿ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿದವು, ಈ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2b, 6a). ನಾವು ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲವಾದ ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನವಾದ KAND 11 ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ (15 µM) ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು KAND 11 ರ ಅನ್ವಯವು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದಿಕ್ಕು ಅಸಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಆದರೂ ಅವು ಎಡಕ್ಕೆ ಇಳಿಜಾರಾಗುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ C3). ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್-ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಔಷಧಿಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಬೇರಿನ ಓರೆಯಾಗುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಬದಲು ಸಸ್ಯದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ, ನಂತರ ನಾವು KAND 11 ರೂಟ್ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ. 25 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾದ ಮೊಳಕೆ ಬೇರುಗಳ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆಂಟಿ-β-ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೊಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿಯು ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿನ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಕಣ್ಮರೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 6b). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕುಮಾಮೊಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿ ಅವುಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಈ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ನವೀನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ. (ಎ) ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬೇರುಗಳ ಇಳಿಜಾರಿನ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಎರಡು ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ: ಡಿಸ್ಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಅನ್ನು ಸಹ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಬಳಸುವ ಮಾನದಂಡವನ್ನು ಇನ್ಸೆಟ್ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ನಕಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಪು< 0.05). n>19. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 1 ಸೆಂ.ಮೀ. (ಬಿ) ಉದ್ದನೆಯ ವಲಯದಲ್ಲಿರುವ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು. 25 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ MS ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಕೋಲ್ ಬೇರುಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು β-ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್-ಸಂಯೋಜಿತ ದ್ವಿತೀಯಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm. (ಸಿ) ರೂಟ್ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ರಚನೆ. ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರೊಫೇಸ್ ವಲಯಗಳು, ಸ್ಪಿಂಡಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ರಾಗ್ಮೋಪ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳಿಂದ ಎಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಬಾಣಗಳು ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಶಾಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (t ಪರೀಕ್ಷೆ, p< 0.05). n>9. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 50 µm.
ಉರ್ಸಾ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, ಅದರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ವಿಶಿಷ್ಟ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್‌ನಂತಹ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಗಳ ಅನಿಸೊಟ್ರೊಪಿಕ್ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ KAND 11 ಹಾಗೆ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, KAND 11 ಮತ್ತು ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್‌ನ ಸಹ-ಅನ್ವಯಿಕತೆಯು ಸಂಯೋಜಿತ ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್-ಪ್ರೇರಿತ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು ಮತ್ತು KAND 11-ಪ್ರೇರಿತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ S4). KAND 11 ಗೆ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಅತಿಸೂಕ್ಷ್ಮ ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್ 1-1 (phs1-1) ನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಹ ನಾವು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. phs1-1 ಕ್ಯಾನೊನಿಕಲ್ ಅಲ್ಲದ ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಕೈನೇಸ್ ಪಾಯಿಂಟ್ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದಾಗ ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ9,20. KAND 11 ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ phs1-1 ರೂಪಾಂತರಿತ ಮೊಳಕೆಗಳು ಡೈಸೋಪಿರಮೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದವುಗಳಿಗೆ ಹೋಲುವ ಕಡಿಮೆ ಬೇರುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು (ಚಿತ್ರ S5).
ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಮೂಲ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರೊಫೇಸ್ ವಲಯಗಳು, ಸ್ಪಿಂಡಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ರಾಗ್ಮೋಪ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಂತಹ ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ಗಾಗಿನ ಅವಲೋಕನಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಮೈಟೊಟಿಕ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಇಳಿಕೆ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ಚಿತ್ರ .6c).
ಉಪಕೋಶೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್‌ನಲ್ಲಿ KAND 11 ನ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು, ನಾವು ತಂಬಾಕು BY-2 ಅಮಾನತು ಕೋಶಗಳನ್ನು KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ KAND 11 ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ನಾವು ಮೊದಲು KAND 11 ಅನ್ನು TagRFP-TUA6 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ BY-2 ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಇಮೇಜ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಿತು. 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ 1 ಗಂಟೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕ್ರಮವಾಗಿ 0.94 ± 0.74% ಅಥವಾ 0.23 ± 0.28% ಕ್ಕೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಆದರೆ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಕೋಶಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 1.61 ± 0.34% ರಷ್ಟಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7a). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಡಿಪೋಲಿಮರೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ವೀಕ್ಷಣೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿವೆ (ಚಿತ್ರ 6b). KAND 11 ರ ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ನಾವು GFP-ABD-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ BY-2 ಲೈನ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. 1 ಗಂಟೆಗೆ 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 1.20 ± 0.62% ಅಥವಾ 0.61 ± 0.26% ಗೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ DMSO-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 1.69 ± 0.51% ಆಗಿತ್ತು (ಚಿತ್ರ 2). 7b). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರದ ಪ್ರೊಪಿಜಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರದ ಆಕ್ಟಿನ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸರ್ ಲ್ಯಾಟ್ರನ್‌ಕ್ಯುಲಿನ್ B ಯ ಪರಿಣಾಮಗಳೊಂದಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿದೆ (SI ಚಿತ್ರ S6). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ 1, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಆಮ್ಲ 6, ಅಥವಾ KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು HeLa ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (SI ಚಿತ್ರ S7). ಹೀಗಾಗಿ, KAND 11 ರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ತಿಳಿದಿರುವ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವವರಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, KAND 11 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳ ನಮ್ಮ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವೀಕ್ಷಣೆಯು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನ ಆಕ್ರಮಣವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು ಮತ್ತು Evans ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮಾಣವು KAND 11 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಲಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಆದರೆ 50 μM ಅಥವಾ 100 μM KAND ನೊಂದಿಗೆ 90 ನಿಮಿಷಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ಕ್ರಮವಾಗಿ 43.7% ಅಥವಾ 80.1% ಕ್ಕೆ ಏರಿತು (ಚಿತ್ರ 7c). ಒಟ್ಟಿಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಡೇಟಾವು ಹೊಸ ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನ KAND 11 ಒಂದು ಸಸ್ಯ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಹಿಂದೆ ತಿಳಿದಿಲ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
KAND ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು, ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ತಂಬಾಕು BY-2 ಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. (a) TagRFP-TUA6 ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ BY-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ದೃಶ್ಯೀಕರಣ. KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 25 ಸ್ವತಂತ್ರ ಕೋಶಗಳ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ. ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (Tukey HSD ಪರೀಕ್ಷೆ, p< 0.05). ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm. (b) GFP-ABD2 ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾದ BY-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳು. KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 25 ಸ್ವತಂತ್ರ ಕೋಶಗಳ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ. ಅಕ್ಷರಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಟುಕಿ HSD ಪರೀಕ್ಷೆ, p< 0.05). ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 10 µm. (c) ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಕಲೆಗಳಿಂದ ಸತ್ತ BY-2 ಕೋಶಗಳ ವೀಕ್ಷಣೆ. KAND 11 (50 μM ಅಥವಾ 100 μM) ಅಥವಾ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಕ್ಷೇತ್ರ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. n=3. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm.
ಹೊಸ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯವು ಔಷಧ ಮತ್ತು ಕೃಷಿ ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾನವ ಜೀವನದ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಗತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ. ನೈಸರ್ಗಿಕ ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳಿಂದ ಉಪಯುಕ್ತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಐತಿಹಾಸಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೀಟ್‌ಗಳು ನೆಮಟೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಪರಾವಲಂಬಿ ವಿರೋಧಿ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಅವೆರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್, ಐವರ್ಮೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಬ್ಲೀಮೈಸಿನ್‌ನ ಸೀಸದ ಸಂಯುಕ್ತ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಔಷಧೀಯವಾಗಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸುತ್ತವೆ21,22. ಅಂತೆಯೇ, ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೀಟ್‌ಗಳಿಂದ ವಿವಿಧ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಈಗಾಗಲೇ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ1,23. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಆಕ್ಟಿನೊಮೈಸೀಟ್ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ತಂತ್ರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಎಸ್. ವೆರೆನ್ಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತ, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಉರ್ಬೆನಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಧ್ಯಂತರವಾಗಿದೆ. ಇದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಬೇರು ಸುರುಳಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು, ಮಧ್ಯಮದಿಂದ ಬಲವಾದ ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಸ್ಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಕೊಳವೆಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಹಾನಿಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರಬಹುದು, ಏಕೆಂದರೆ KAND 11 ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ರಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುವ ನಿಯಂತ್ರಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿವರವಾದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆಯೇ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೀಕರಿಸುತ್ತವೆಯೇ ಅಥವಾ ಅವುಗಳ ಕ್ರಿಯೆಯು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಅಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕಡಿಮೆಯಾದ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಮುಂದಿನ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ನೇರ ಗುರಿಯಾಗಿಲ್ಲದ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಸ್ಥಳ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಸಸ್ಯನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಸಂಭಾವ್ಯ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾ, ತಂಬಾಕು ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ನಂತಹ ಸಸ್ಯಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವಿಶಿಷ್ಟ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು, ಆದರೆ ಇ. ಕೋಲಿ ಅಥವಾ ಹೆಲಾ ಕೋಶಗಳು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ. ಪ್ರಾಣಿ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ಯಾವುದೇ ವಿಷತ್ವವು ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪ್ರಯೋಜನವಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳನ್ನು ತೆರೆದ ಕೃಷಿ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರೆ. ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ರಚನೆಗಳಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಆಯ್ದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಿಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಾಗಿದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್‌ಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವ ಮತ್ತು ಪಾಲಿಮರೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡಿಪೋಲಿಮರೈಸಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್ ಪ್ರೊಪಿಜಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಾಣಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ವಿಷತ್ವದಿಂದಾಗಿ ಸಸ್ಯನಾಶಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ24. ಡಿಸ್ಪೈರಮೈಡ್‌ಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಸಂಬಂಧಿತ ಬೆಂಜಮೈಡ್‌ಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಗುರಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಸಸ್ಯ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಜೊತೆಗೆ, RH-4032 ಅಥವಾ ಬೆಂಜೊಕ್ಸಮೈಡ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ ಪ್ರಾಣಿ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಓಮೈಸೀಟ್‌ಗಳ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಲಿಲಾಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಅದರ ಕಡಿಮೆ ಫೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯಿಂದಾಗಿ ಶಿಲೀಂಧ್ರನಾಶಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ25,26,27. ಹೊಸದಾಗಿ ಪತ್ತೆಯಾದ ಕರಡಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಸಸ್ಯಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಆಯ್ದ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಮತ್ತಷ್ಟು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳು ಅವುಗಳ ಗುರಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು, ರೋಗಕಾರಕ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳು ಅಥವಾ ಓಮೈಸೀಟ್‌ಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಒದಗಿಸಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಸಂಗತಿ.
ಅರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಸಸ್ಯನಾಶಕಗಳಾಗಿ ಅವುಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಮತ್ತು ಸಂಶೋಧನಾ ಸಾಧನಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲು ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿವೆ. ಸಸ್ಯ ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಸಸ್ಯಗಳು ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಂಘಟನೆಯ ಸಂಕೀರ್ಣ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ವಿಕಸನಗೊಳಿಸಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ. ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಅಣುಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಂಶೋಧನೆ ಇನ್ನೂ ನಡೆಯುತ್ತಿದೆ3,4,28. ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್‌ನ ನಮ್ಮ ಪ್ರಸ್ತುತ ತಿಳುವಳಿಕೆಯು ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸಂಘಟನೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ವಿವರಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಡಿಸ್ಒಪಿರಮೈಡ್ ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಎರಡೂ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿಪೋಲಿಮರೀಕರಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಡಿಸ್ಒಪಿರಮೈಡ್ ತೀವ್ರ ಬೇರಿನ ವಿರೂಪವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಒರಿಜಲಿನ್ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸೌಮ್ಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್‌ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಬೇರುಗಳಲ್ಲಿ ಡೆಕ್ಸ್ಟ್ರೋರೋಟೇಶನ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪ್ಯಾಕ್ಲಿಟಾಕ್ಸೆಲ್ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಉರ್ಸೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಗುರುತಿಸುವುದು ಸಸ್ಯ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಬಗ್ಗೆ ಹೊಸ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬೇಕು. ಅದೇ ರೀತಿ, ಡಿಸ್ಪೈರಮೈಡ್‌ನಂತಹ ವಿಕೃತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾದ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳು ಮತ್ತು ಒರಿಜಲಿನ್ ಅಥವಾ ಕುಮಾಮೊಟೊರಿಕ್ ಆಮ್ಲದಂತಹ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳ ಭವಿಷ್ಯದ ಹೋಲಿಕೆಗಳು ವಿಕೃತ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಹೇಗೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದರ ಸುಳಿವುಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ.
ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ರಕ್ಷಣಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಮರುಜೋಡಣೆಗಳು ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಮತ್ತೊಂದು ಸಾಧ್ಯತೆಯಾಗಿದೆ. ರೋಗಕಾರಕದ ಸೋಂಕು ಅಥವಾ ಸಸ್ಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಎಲಿಸಿಟರ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವುದರಿಂದ ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ನಾಶ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ 29. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಓಮೈಸೀಟ್-ಪಡೆದ ಕ್ರಿಪ್ಟೋಕ್ಸಾಂಥಿನ್ ತಂಬಾಕು ಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಮೊದಲು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಇದು KAND ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಭವಿಸುವಂತೆಯೇ 30,31. ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆಗಳು ಅವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಲು ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಆದಾಗ್ಯೂ ಕ್ರಿಪ್ಟೋಕ್ಸಾಂಥಿನ್‌ಗಿಂತ ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಬಲವಾದ ಪರಿಣಾಮವು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಅಡ್ಡಿಯು ಸ್ವಯಂಪ್ರೇರಿತ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಯಾವಾಗಲೂ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಅಡ್ಡಿಯೊಂದಿಗೆ ಇರುವುದಿಲ್ಲ 29. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಉರ್ಸಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಂತೆ ರೋಗಕಾರಕ ಅಥವಾ ಎಲಿಸಿಟರ್ ವಿರೂಪಗೊಂಡ ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನೋಡಬೇಕಾಗಿದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಜ್ಞಾನವು ಗಮನಹರಿಸಬೇಕಾದ ಆಕರ್ಷಕ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗಿದೆ. ಉರ್ಸೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಕಡಿಮೆ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಹಾಗೂ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಶ್ರೇಣಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ, ಅವು ಅಜ್ಞಾತ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಲು ಅವಕಾಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು.
ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯವು ಸಸ್ಯ ಕೋಶದ ಆಕಾರ ನಿರ್ಣಯದ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಸಂಕೀರ್ಣ ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಪ್ರಬಲ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾದ ಸಂಯುಕ್ತ ಉರ್ಮೋಟೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಈ ಇತರ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಅವಕಾಶವನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು. ಹೀಗಾಗಿ, ಉರ್ಬೆನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ರಾಸಾಯನಿಕ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಸಸ್ಯ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ನಿಯಂತ್ರಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ನಮಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
2% (w/v) ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸ್, 2% (w/v) ಎಸೆನ್ಸ್ ಪೇಸ್ಟ್, 1% (w/v) ಬ್ಯಾಕ್ಟೋ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ 110 mL ಬೀಜ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 500 mL ಬ್ಯಾಫಲ್ಡ್ ಎರ್ಲೆನ್‌ಮೆಯರ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ S. ವೆರಾಯೆನ್ಸಿಸ್ MK493-CF1 ಅನ್ನು ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಿ. -ಸೋಯ್ಟನ್ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ಇಂಕ್.), 0.5% (w/v) ಕಾರ್ನ್ ಸಾರ (KOGOSCH ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಜಪಾನ್), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 ಮತ್ತು 0.2% CaCO3 ಅನ್ನು ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಹಾಕಿ. (ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು pH 7.4). ಬೀಜ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 27°C ನಲ್ಲಿ ರೋಟರಿ ಶೇಕರ್‌ನಲ್ಲಿ (180 rpm) 2 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಘನ ಸ್ಥಿತಿಯ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಉತ್ಪಾದನಾ ಕೃಷಿ. ಬೀಜ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು (7 ಮಿಲಿ) 15 ಗ್ರಾಂ ಒತ್ತಿದ ಬಾರ್ಲಿ (MUSO ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಜಪಾನ್) ಮತ್ತು 25 ಗ್ರಾಂ ಅಯಾನೀಕರಿಸಿದ ನೀರನ್ನು (ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಕ್ಕೆ ಮೊದಲು pH ಅನ್ನು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ) ಒಳಗೊಂಡಿರುವ 40 ಗ್ರಾಂ ಉತ್ಪಾದನಾ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 500 ಮಿಲಿ K-1 ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. 14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ 30 ° C ನಲ್ಲಿ ಹುದುಗುವಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಹುದುಗುವಿಕೆ ವಸ್ತುವನ್ನು 40 ಮಿಲಿ/ಬಾಟಲ್ EtOH ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ (1500 ಗ್ರಾಂ, 4 ° C, 10 ನಿಮಿಷ) ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸೂಪರ್ನೇಟಂಟ್ (60 ಮಿಲಿ) ಅನ್ನು 10% MeOH/EtOAc ಮಿಶ್ರಣದಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. ಕಡಿಮೆ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಶೇಷವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾವಯವ ಪದರವನ್ನು ಆವಿಯಾಗಿಸಲಾಯಿತು (59.5 ಮಿಗ್ರಾಂ), ಇದನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತದ ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಎಲ್ಯೂಷನ್ (0–10 ನಿಮಿಷಗಳು: 90%) ನೊಂದಿಗೆ HPLC ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID 10 mm × ಉದ್ದ 250 mm) H2O/CH3CN, 10–35 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O/CH3CN ನಿಂದ 70% H2O/CH3CN (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್), 35–45 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O/EtOH, 45–155 ನಿಮಿಷಗಳು: 90% H2O/EtOH ನಿಂದ 100% EtOH (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್), 155–200 ನಿಮಿಷ: 100% EtOH) 1.5 ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷದ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ, ಕೂಮಮೊನಮೈಡ್ (1, 36.0 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಅನ್ನು ಬಿಳಿ ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ಪುಡಿಯಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು.
ಕುಮಾಮೊಟೊಮೈಡ್(1); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H). ), 4.08 (s, 3H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3; ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿದ ಮೌಲ್ಯ: 141.0659, ಅಳತೆ ಮಾಡಿದ ಮೌಲ್ಯ: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 1593, 1537 cm–1.
ಕೊಲಂಬಿಯಾ ಬೀಜಗಳನ್ನು (Col-0) ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಜೈವಿಕ ಸಂಪನ್ಮೂಲ ಕೇಂದ್ರದಿಂದ (ABRC) ಸಂಶೋಧನಾ ಬಳಕೆಗೆ ಅನುಮತಿಯೊಂದಿಗೆ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು. ಕೋಲ್-0 ಬೀಜಗಳನ್ನು ನಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಸಾರ ಮಾಡಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಸಸ್ಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅರ್ಧ-ಶಕ್ತಿಯ ಮುರಾಶಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 2% ಸುಕ್ರೋಸ್ (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್), 0.05% (w/v) 2-(4-ಮಾರ್ಫೊಲಿನೊ)ಈಥೇನ್ಸಲ್ಫೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ (MES) (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್). ) ಮತ್ತು 1.5% ಅಗರ್ (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್), pH 5.7, 23 °C ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿತ್ತು. phs1-1 ರೂಪಾಂತರದ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಟಿ. ಹಶಿಮೊಟೊ (ನಾರಾ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಆಫ್ ಸೈನ್ಸ್ ಅಂಡ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಒದಗಿಸಿದರು.
SR-1 ತಳಿಯ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಟಿ. ಹಶಿಮೊಟೊ (ನಾರಾ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಆಫ್ ಸೈನ್ಸ್ ಅಂಡ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಒದಗಿಸಿತು ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ತಂಬಾಕು ಸಸ್ಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವುದನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ತಂಬಾಕು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಗೊಳಿಸಿ ಮೂರು ರಾತ್ರಿಗಳ ಕಾಲ ಬರಡಾದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಿ, ನಂತರ 2% ಸುಕ್ರೋಸ್, 0.05% (w/v) MES, ಮತ್ತು 0.8% ಗೆಲ್ಲನ್ ಗಮ್ (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ಮುರಾಶಿಗೆ. ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮ) ಹೊಂದಿರುವ ಅರ್ಧ-ಶಕ್ತಿಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ pH 5.7 ನೊಂದಿಗೆ ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 23°C ನಲ್ಲಿ ನಿರಂತರ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು.
ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಟಕ್-1 ಅನ್ನು ಟಿ. ಕೊಹ್ಚಿ (ಕ್ಯೋಟೋ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯ) ಒದಗಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಘಟಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಗೆಮ್ಮಾವನ್ನು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಕೃಷಿ ಮಾಡಿದ ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 1% ಸುಕ್ರೋಸ್ ಮತ್ತು 0.3% ಗೆಲ್ಲನ್ ಗಮ್ ಹೊಂದಿರುವ ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ ಬಿ 5 ಮಾಧ್ಯಮದ (ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ಮೇಲೆ ಲೇಪಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಿರಂತರ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ 23 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು.
ತಂಬಾಕು BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು (ನಿಕೋಟಿಯಾನಾ ಟಬಾಕಮ್ L. cv. ಬ್ರೈಟ್ ಯೆಲ್ಲೋ 2) ಎಸ್. ಹಸೆಜಾವಾ (ಟೋಕಿಯೋ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯ) ಒದಗಿಸಿದ್ದಾರೆ. BY-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಲಿನ್ಸ್‌ಮಿಯರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಕೂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 95 ಪಟ್ಟು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಾರಕ್ಕೊಮ್ಮೆ 2,4-ಡೈಕ್ಲೋರೋಫೆನಾಕ್ಸಿಯಾಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ 32 ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ಕೋಶ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ 27°C ನಲ್ಲಿ 130 rpm ನಲ್ಲಿ ರೋಟರಿ ಶೇಕರ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೆರೆಸಲಾಯಿತು. ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದ 10 ಪಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣದೊಂದಿಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ಅದೇ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮರುಹೊಂದಿಸಿ. ಹೂಕೋಸು ಮೊಸಾಯಿಕ್ ವೈರಸ್ 35S ಪ್ರವರ್ತಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಮಾರ್ಕರ್ TagRFP-TUA6 ಅಥವಾ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ ಮಾರ್ಕರ್ GFP-ABD2 ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ BY-2 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್ ಕೋಶ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗಿದೆ33,34,35. ಈ ಕೋಶ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಮೂಲ BY-2 ಕೋಶ ರೇಖೆಗೆ ಬಳಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು.
5% CO2 ಹೊಂದಿರುವ 37°C ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 10% ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್, 1.2 U/ml ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು 1.2 μg/ml ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಡಲ್ಬೆಕೊದ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಈಗಲ್ಸ್ ಮಾಧ್ಯಮ (DMEM) (ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ನಲ್ಲಿ HeLa ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.
ಈ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಜಪಾನಿನ ಜೈವಿಕ ಸುರಕ್ಷತಾ ನಿಯಮಗಳು ಮತ್ತು ಮಾರ್ಗಸೂಚಿಗಳಿಗೆ ಅನುಸಾರವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ.
ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಡೈಮಿಥೈಲ್ ಸಲ್ಫಾಕ್ಸೈಡ್ (DMSO; ಫ್ಯೂಜಿಫಿಲ್ಮ್ ವಾಕೊ ಪ್ಯೂರ್ ಕೆಮಿಕಲ್) ನಲ್ಲಿ ಸ್ಟಾಕ್ ದ್ರಾವಣಗಳಾಗಿ ಕರಗಿಸಿ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್‌ಗಾಗಿ MS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್‌ಗಾಗಿ ತಂಬಾಕು ಅಥವಾ ಗ್ಯಾಂಬೋರ್ಗ್ B5 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ಬೇರಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 10 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬಿತ್ತಲಾಯಿತು. ಬೀಜಗಳನ್ನು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ಛಾಯಾಚಿತ್ರ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೇರುಗಳ ಉದ್ದವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 48 ಬೀಜಗಳನ್ನು 200 μM ಸಂಯುಕ್ತ ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬಿತ್ತಲಾಯಿತು. ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ 7 ದಿನಗಳ ನಂತರ (dag) ಎಣಿಸಲಾಯಿತು. ತಂಬಾಕು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆಯುವಿಕೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 24 ಬೀಜಗಳನ್ನು 200 μM KAND ಅಥವಾ DMSO ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬಿತ್ತಲಾಯಿತು. ತಂಬಾಕು ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮೊಳಕೆಯೊಡೆದ ಮೊಳಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು 14 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಎಣಿಸಲಾಯಿತು. ಲಿವರ್‌ವರ್ಟ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ತಟ್ಟೆಯಿಂದ 9 ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸಲಾದ KAND ಅಥವಾ DMSO ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿಸಿ 14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು.
ಬೇರುಗಳ ಮೆರಿಸ್ಟಮ್ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು 5 mg/ml ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಸಸಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ. TCS SPE ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಲೈಕಾ ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಬಳಸಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ PI ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.
ಮಲಾಮಿ ಮತ್ತು ಬೆನ್ಫೆ36 ವಿವರಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ ಬೇರುಗಳ ಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಅನ್ನು β-ಗ್ಲುಕುರೊನಿಡೇಸ್ (GUS) ನೊಂದಿಗೆ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಮೊಳಕೆಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ 90% ಅಸಿಟೋನ್‌ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು, GUS ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ 0.5 mg/ml 5-ಬ್ರೋಮೋ-4-ಕ್ಲೋರೋ-3-ಇಂಡೋಲಿಲ್-β-d-ಗ್ಲುಕುರೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲದೊಂದಿಗೆ 1 ಗಂಟೆ ಕಲೆ ಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೀಕರಿಸಿದ ಕ್ಲೋರಲ್ಡಿಹೈಡ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. (8 ಗ್ರಾಂ ಕ್ಲೋರಲ್ ಹೈಡ್ರೇಟ್, 2 ಮಿಲಿ ನೀರು ಮತ್ತು 1 ಮಿಲಿ ಗ್ಲಿಸರಾಲ್) ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಯೊ ಇಮೇಜರ್ M1 ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಕಾರ್ಲ್ ಜೈಸ್) ಬಳಸಿ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಂಟರ್‌ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.
ಲಂಬವಾಗಿ ಇರಿಸಲಾದ ತಟ್ಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ 7 ದಿನಗಳ ಸಸಿಗಳ ಮೇಲೆ ಬೇರಿನ ಕೋನಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಹಂತ 6 ರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಗುರುತ್ವಾಕರ್ಷಣೆಯ ವೆಕ್ಟರ್‌ನ ದಿಕ್ಕಿನಿಂದ ಬೇರಿನ ಕೋನವನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ.
ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ 37 ಗೆ ಸಣ್ಣ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಕಾರ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆಂಟಿ-β-ಟ್ಯೂಬ್ಯುಲಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ (KMX-1, ಮೆರ್ಕ್ ಮಿಲಿಪೋರ್: MAB3408) ಮತ್ತು ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ 488-ಸಂಯೋಜಿತ ಆಂಟಿ-ಮೌಸ್ IgG (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್: A32723) ಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 1:1000 ಮತ್ತು 1:100 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. TCS SPE ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಲೈಕಾ ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಬಳಸಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. Z- ಸ್ಟ್ಯಾಕ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಗರಿಷ್ಠ ತೀವ್ರತೆಯ ಪ್ರಕ್ಷೇಪಗಳನ್ನು ರಚಿಸಿ.
ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಸೆಲ್ ಕೌಂಟಿಂಗ್ ಕಿಟ್ 8 (ಡೊಜಿಂಡೋ) ಬಳಸಿ HeLa ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
600 nm (OD600) ನಲ್ಲಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಬಳಸಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ E. coli DH5α ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್ BY-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಂಘಟನೆಯನ್ನು CSU-X1 ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಸಾಧನ (ಯೊಕೊಗಾವಾ) ಮತ್ತು sCMOS ಕ್ಯಾಮೆರಾ (ಝೈಲಾ, ಆಂಡೋರ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ) ಹೊಂದಿದ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಬಳಸಿ ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. ಇಮೇಜ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಇಮೇಜ್‌ಜೆ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲಿನ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಿತು38,39.
BY-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, ಕೋಶದ ಸಸ್ಪೆನ್ಶನ್‌ನ ಒಂದು ಭಾಗವನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 0.05% ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಿಂದ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಆಯ್ದ ಇವಾನ್ಸ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವು ಅಖಂಡ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯಿಂದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವುದರ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ-ಕ್ಷೇತ್ರ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು (BX53, ಒಲಿಂಪಸ್) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.
37°C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 10% FBS ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ DMEM ನಲ್ಲಿ HeLa ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 37°C ನಲ್ಲಿ 6 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 100 μM KAND 11, ಕುಮಾಮೊನಾಮಿಕ್ ಆಮ್ಲ 6, ಕುಮಾಮೊನಮೈಡ್ 1, 100 ng/ml ಕೋಲ್ಸೆಮಿಡ್ (ಗಿಬ್ಕೊ), ಅಥವಾ 100 ng/ml ನೊಕೊಡ್ಮೇಜ್ (ಸಿಗ್ಮಾ) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಕೋಶಗಳನ್ನು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ MetOH ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಅಸಿಟೇಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಥಿರ ಕೋಶಗಳನ್ನು 0.5% BSA/PBS ನಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ β-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯ (1D4A4, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಟೆಕ್: 66240-1) ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು, TBST ಯೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೂರ್ ಮೇಕೆ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 488 1 ಗಂಟೆ. – ಮೌಸ್ IgG (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್: A11001) ಮತ್ತು 15 ng/ml 4′,6-ಡಯಾಮಿಡಿನೊ-2-ಫೀನಿಲಿಂಡೋಲ್ (DAPI) ಅನ್ನು 0.5% BSA/PBS ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. TBST ಯೊಂದಿಗೆ ಮೂರು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ, ನಿಕಾನ್ ಎಕ್ಲಿಪ್ಸ್ Ti-E ತಲೆಕೆಳಗಾದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. ಮೆಟಾಮಾರ್ಫ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಆಣ್ವಿಕ ಸಾಧನಗಳು) ಬಳಸಿ ತಂಪಾಗಿಸಿದ ಹಮಾಮಟ್ಸು ORCA-R2 CCD ಕ್ಯಾಮೆರಾದೊಂದಿಗೆ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ.